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土壤脲酶(SUE)测试盒可见分光光度法样品处理

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土壤脲酶(SUE)测试盒可见分光光度法样品处理
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。处理后的土样需精确称取适量(如0.5g)置于已编号的离心管中,随后加入一定量的缓冲溶液(如pH 6.7的柠檬酸盐缓冲液),以模拟土壤中的自然环境并激活土壤脲酶活性。接着,向每个离心管中加入一定量的底物——尿素溶液,确保尿素浓度适中,以充分反映土壤脲酶的催化能力而不产生抑制效应。轻轻摇匀后,将离心管置于恒温培养箱中,在适宜的温度(如30℃)下培养一定时间(如24小时),让土壤脲酶充分作用于尿素,生成氨和二氧化碳。

培养结束后,取出离心管,为去除土壤颗粒及可能干扰后续测定的杂质,需进行离心处理,转速和时间需根据实验条件优化设定,通常可选择3000rpm离心10分钟。离心后,小心吸取上清液至新的试管中,准备进行氨的测定。

氨的测定采用纳氏试剂分光光度法,即向上清液中加入适量纳氏试剂,该试剂与氨反应生成淡黄至棕色的络合物,其颜色深浅与氨含量成正比。随后,将试管置于可见分光光度计中,在特定波长(如420nm)下测定吸光度值。通过预先绘制的标准曲线,可将测得的吸光度值转换为对应的氨含量,进而计算出土壤脲酶的活性。

此过程不仅要求实验操作精细,还需严格控制每一步的条件,以保证测试结果的准确性和可靠性。通过土壤脲酶活性的测定,我们可以了解土壤健康状况、评估土壤肥力及氮肥利用效率,为农业生产中的合理施肥提供科学依据。

测定操作:
1 、培养 测定管 对照管 风干土样(g) 0.25 0.25 试剂一(μL) 125 125 振荡混匀,室温放置 15min 试剂二(μL) 625 蒸馏水(μL) 625 试剂三(μL) 1250 1250 混匀,放入 37℃水浴培养 24h 后,10000g 25℃离心 10min,取上清液。 2、将培养结束的上清液稀释 10 倍(取 0.1mL 上清液,加入 0.9mL 蒸馏水)。 3、测氨量 测定管 对照管 稀释后的上清液(μL) 400 400 试剂四(μL) 80 80 试剂五(μL) 60 60 充分混匀,室温放置 20min 蒸馏水(μL) 460 460 混匀, 578nm 处蒸馏水调零,测 A 值,ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。



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