毒素小分子偶联蛋白，如何判断是否偶联上，并且计算偶联比?

如果你用来做免疫抗原的偶联蛋白是BSA和OVA，建议跑SDS-PAGE。如果偶联成功，跑完电泳后，偶联蛋白（BSA或OVA）、偶联物（小分子-偶联蛋白）和蛋白质Marker会在胶块上出现条带，可以明显看出偶联物相比于偶联蛋白的迁移速率小，表明偶联物的相对分子质量较大，偶联成功，这时候用紫外凝胶成像系统可以计算偶联物的相对分子质量，二者数值相减后除以小分子的分子量，即可计算出分子结合比。但是如果你用KLH作为偶联蛋白，这种方法就不太适用了，因为与小分子相比，KLH的分子量太大，在胶块上看不出来前后的区别，并且电泳时间会很长。

红外、质谱（如MALDI-TOF）和核磁都可以解决这个问题。红外通过测定小分子半抗原、载体蛋白、完全抗原三者对应的特征吸收峰来确定；质谱则可以更加快速分析分子量差别，进而计算偶联比例。