烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEVp)是一种重要的工程蛋白,其结构稳定性对其功能至关重要。钴离子(Co2+)具有一定的生物毒性。为了了解Co2+对TEVp结构的影响,我们使用了内源荧光方法和同步荧光方法来研究Co2+对TEVp结构的调控机制。
我们的光谱研究显示,Co2+对Recombinant Tobacco EV内源荧光有明显的淬灭作用,导致TEVp分子中色氨酸酪氨酸残基的疏水性增加。在不同温度下的实验结果表明,Co2+对TEVp的淬灭机制属于静态淬灭。吉布斯自由能ΔG < 0,焓值ΔH < 0且熵值ΔS > 0,表明Co2+与Recombinant Tobacco EV的相互作用能够自发进行,且它们之间的主要作用力类型为静电作用力。
以往的光谱学研究发现,蛋白质的荧光性质与其氨基酸残基所处微环境的疏水性密切相关。我们的实验结果显示,Co2+对Recombinant Tobacco EV内源荧光发射光谱有明显的影响。随着Co2+浓度的增加,荧光发射波长逐渐蓝移,表明荧光发色氨基酸周围微环境的疏水性增加,其周围结构更加紧密。
根据淬灭机制的不同,荧光淬灭过程通常有静态淬灭和动态淬灭两种方式。我们的研究结果表明,Co2+对Recombinant Tobacco EV的荧光淬灭方式应为静态淬灭。这意味着Co2+与TEVp形成了不发光的配合物,而不是通过动态淬灭的方式进行相互作用。
[1] 钴离子对烟草蚀纹病毒蛋白酶结构的影响
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