琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒采用DNA硅基质材料和缓冲液系统，可以高效、专一地回收DNA片段。该试剂盒可除去蛋白质、有机化合物、无机盐离子和寡核苷酸引物等杂质，并可回收100bp-10kb大小的片段，回收率大于80%（小于100bp和大于100kb的片段回收率为30-50%）。使用该试剂盒回收的DNA适用于酶切、PCR、测序、文库筛选、连接和转化等常规操作。
1. 在电泳前最好更换新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2. 如果下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。
3. 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。
4. 回收小于100bp和大于100kb的DNA片段时，应加大溶胶液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
5. 回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。
6. 如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、琼脂糖凝胶电泳后，将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入干净的离心管中，称取重量。
2、向胶块中加入3倍体积溶胶液（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100ul，则加入300ul溶胶液），50-55℃水浴放置10min，期间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。注意：溶胶时，如果溶胶液变为红色（正常情况下为淡黄色），可向含有DNA的胶溶液中加入10-30ul3M醋酸钠（pH5.2）将胶溶液调为淡黄色，否则将会影响DNA与吸附柱的结合，影响回收效率。
3、将上一步所得溶液加入一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。注意：胶块完全溶解后最好将胶溶液温度降至室温再上柱，因为吸附柱在较高温度时结合DNA的能力较弱。
4、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
5、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
6、12000rpm离心2min，尽量除去漂洗液。将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，防止漂洗液中的乙醇影响后续的实验。
7、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加适量经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置2min，12000rpm离心1min。注意：1)、为了增加回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，12000rpm再次离心1min。
2)、洗脱缓冲液体积不应少于30ul，体积过小影响回收效率。3)、洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5之间。
8、DNA产物-20℃保存。
[1] 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒说明书
1
