本文将探讨如何测定药物中龙胆苦苷的含量，这是一项关键的药物分析任务，有助于确保药品质量和安全性。通过介绍分析方法和技术步骤，我们可以更准确地确定药物中龙胆苦苷的含量，为药品监管和质量控制提供重要参考。
简述：龙胆草在中药制剂中应用广泛，用量大。现行药典规定龙胆草的药用部分为干根，而大量的茎、叶、花被丢弃。
研究发现，根和根茎中含有裂环醚萜苷、生物碱、类黄酮、类固醇、香豆素和内酯等化合物。其中，龙胆苦苷含量最高，被中国药典定为质量标准控制的目标成分。龙胆苦苷是一种环醚萜苷类化合物，现代药理研究表明其具有抗抑郁、保肝、抗肿瘤、抗炎、糖尿病和骨质疏松作用。
含量测定：
1. 报道一
吴勇等人建立高效液相色谱法同时测定金胆片中4种主要活性成分含量的方法。研究采用Agilent Eclipse X DB C18(4.6 mm×250 mm，5μm)色谱柱；以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相梯度洗脱，检测波长为270 nm；柱温为30℃；流速1.0 mL·min-1。
龙胆苦苷、虎杖苷、槲皮素和大黄素质量浓度分别在7.875～78.75μg·mL-1(r=0.999 9)、6.75～67.50μg·mL-1(r=0.999 7)、7.726～77.26μg·mL-1(r=0.999 4)、3.809～38.09μg·mL-1(r=0.999 8)范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为99.31%、99.21%、99.04%、99.59%(n=6)，RSD分别为1.86%、1.24%、1.37%、1.15%。该实验方法准确性可靠、重复性和稳定性良好，专属性强，可为金胆片的质量控制和标准提升提供参考依据。
2. 报道二
江涛等人建立了同时测定追风透骨丸中龙胆苦苷和芍药苷含量的高效液相色谱法。研究采用的色谱柱为Agilent Eclipse Plus C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（30∶70，V/V），流速为1.0 mL/min，检测波长为230 nm，柱温为30℃，进样量为10μL。
龙胆苦苷和芍药苷质量浓度分别在15.718～157.175μg/mL和16.095～160.949μg/mL范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9，n=6）；精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%；平均加样回收率分别为99.77%和99.28%，RSD分别为0.66%和0.60%(n=9)。12批样品中龙胆苦苷和芍药苷的平均含量分别为0.856，1.174 mg/g。该方法操作简便、结果准确、重复性及专属性良好，可用于同时测定追风透骨丸中龙胆苦苷和芍药苷的含量。
3. 报道三
眭荣春等人建立HPLC法测定蕲蛇药酒中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量。研究采用Ultimate Plus C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相为乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm，柱温为30℃，进样量为10μL。
马钱苷酸和龙胆苦苷分别在浓度为0.012 60 mg/mL～0.314 9 mg/mL和0.020 17 mg/mL～0.504 2 mg/mL范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率分别为100.19%、96.62%，RSD均小于2.0%。该HPLC法简便、准确，重复性好，可用于测定蕲蛇药酒中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量。
4. 报道四
安艳苏等人建立了高效液相色谱法测定和血明目片中龙胆苦苷、木犀草苷、黄芩苷3种成分的含量。研究采用Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；柱温：30 ℃；流动相：0.1%磷酸溶液-乙腈，梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm。
和血明目片的最佳提取方式为甲醇50 mL超声提取30 min。龙胆苦苷、木犀草苷、黄芩苷的线性范围分别为8.04 μg/mL～80.40 μg/mL(r=0.999 5)、3.28 μg/mL～32.80 μg/mL(r=0.999 8)、10.64 μg/mL～106.37 μg/mL(r=0.999 0)；加样回收率的范围在96.50%～102.13%之间；稳定性、重复性试验的RSD值均小于2.3%。该法专属性强、操作简便、结果准确，稳定性好，可用于和血明目片中龙胆苦苷、木犀草苷、黄芩苷的含量测定。
5. 报道五
张丽娟等人建立了同时测定鼻咽清颗粒中龙胆苦苷、迷迭香酸和蒙花苷3种活性成分含量的反相高效液相色谱法。研究采用的色谱柱为ACE Excel C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱)，流速为1.0 mL/min，检测波长为274 nm(0～20 min时龙胆苦苷)、334 nm(20～40 min时迷迭香酸和蒙花苷)，柱温为30℃，进样量为10μL。
龙胆苦苷、迷迭香酸、蒙花苷质量浓度分别在5.29～169.34μg/mL(r=1.000 0，n=6)，1.00～32.09μg/mL (r=0.999 7，n=6)，2.28～72.88μg/mL(r=1.000 0，n=6)范围内与峰面积线性关系良好，精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0%，平均回收率分别为100.18%，98.63%，99.34%，RSD分别为1.47%，2.09%，2.17%(n=9)。所建立的方法能有效控制其中的活性成分，前处理简单，重复性好，准确度高，可用于同时测定鼻咽清颗粒中龙胆苦苷、迷迭香酸和蒙花苷的含量，完善其质量标准。
参考：
[1]吴勇,刘燕,丁茹,等. HPLC法同时测定金胆片中龙胆苦苷等4种主成分的含量 [J]. 中国药品标准, 2024, 25 (01): 94-98. DOI:10.19778/j.chp.2024.01.016.
[2]江涛,陈丽斯,彭红英,等. 高效液相色谱法同时测定追风透骨丸中龙胆苦苷和芍药苷含量 [J]. 中国药业, 2023, 32 (13): 83-86.
[3]孙楷超,段小群. 龙胆苦苷的药理作用机制的研究进展 [J]. 广东化工, 2023, 50 (08): 105-107.
[4]眭荣春,李金林,周玉春,等. HPLC法测定蕲蛇药酒中马钱苷酸和龙胆苦苷的含量 [J]. 药品评价, 2022, 19 (23): 1423-1426. DOI:10.19939/j.cnki.1672-2809.2022.23.04.
[5]安艳苏,毕秋左,张顺平. 高效液相色谱法测定和血明目片中龙胆苦苷、木犀草苷和黄芩苷含量 [J]. 药品评价, 2022, 19 (03): 137-140. DOI:10.19939/j.cnki.1672-2809.2022.03.03.
[6]张丽娟,蓝献泉,郑锦坤,等. 反相高效液相色谱法同时测定鼻咽清颗粒中龙胆苦苷、迷迭香酸和蒙花苷含量 [J]. 中国药业, 2021, 30 (21): 62-65.
[7]https://en.wikipedia.org/wiki/Gentiana_macrophylla
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