王浆酸是一种具有多种生理活性的物质,在医学和保健领域备受关注。然而,从天然来源中提取王浆酸成本高昂且困难,因此检测和提取王浆酸的方法备受研究者关注。
背景:目前,王浆酸(10-羟基-2-癸烯酸,简称10-HDA)的化学合成主要采用蓖麻油等作为原料,经过高温裂解等反应制备。然而,在实验室以及工业化生产10-HDA的过程中,常常存在副产物较多、分离较困难的现象。因此,要快速、准确分析10-HDA的含量及纯度往往十分复杂。尽管目前有部分关于10-HDA含量测定的方法如紫外分光光度法、气相色谱法、薄层色谱法等,但是这些方法仅仅限于分离纯化后的10-HDA的含量及纯度检测,对于工业化生产10-HDA的反应过程中快速分析其含量仍然存在很多问题。
检测:
1. 彭川等人采用高效液相色谱法对蓖麻油等为原料合成的王浆酸(10-HDA)进行了定量分析,建立了一种实验室内快速准确分析王浆酸含量的简便检测方法。色谱条件为C18型色谱柱,流动相为:无水甲醇/水/0.01 mol/L盐酸=55/35/10(体积比),流速为0.6 m L/min,波长为212 nm,柱温为 40℃,进样体积为5μL。当标准溶液的浓度降到4.0 mg/L时,检测效果较差,而对浓度为 2.5 mg/L的标准溶液则无法检测出来。因此,得到该检测方法的最低检测限为5.5 mg/L。
2. 刘斌等人建立HPLC法测定蜂王浆冻干粉中王浆酸(10-HDA)的含量。采用Hypersil C18(250×4.6mm,5um)色谱柱,以甲醇-水-0.03MHCI(55:35:10)为流动相,流速为1.000mL/moL,检测波长210nm,柱温35℃。10-HDA在0.05-0.5mg·mL-1范围内峰面积比值与浓度呈良好的线形关系(r=0.9978),精密度为0.42%(n=6)。采用HPLC测定蜂王浆冻干粉中王浆酸的含量,准确、分离度好,可作质量控制。
其中,在供试品溶液的制备过程中,曾选用甲醇、无水乙醇对样品进行处理,其中无水乙醇对样品的溶解性较好,蛋白质沉淀,上清液澄明度好,而且蜂王浆冻干粉其他成分影响小, 流动相采用甲醇-水-0.03MHC1,王浆酸与内标物分离好,专属性强,测定结果准确,可用于控制冻干粉质量,也可采用流动相甲醇-0.01moL/L磷酸二氢钠溶液(1:1)(用磷酸调pH=2.5),波长215nm外标法测定含量,但定量准确性不及内标法,因此采用内标法测定含量较理想。
提取:从蜂王浆中提取王浆酸是先将蜂王浆用乙醚萃取, 再用稀碳酸氢钠反萃取, 用盐酸调pH值至2, 置冰浴中沉析, 然后滤出结晶, 洗涤、干燥得白色晶体, 再用稀乙醇重结晶, 得白色晶体。
也可以将王浆渣用水溶解, 用乙醚萃取, 取乙醚层浓缩至干, 可得粗产品, 再用稀甲醇重结晶, 得无色针状结晶, 与从日本商事株式会社进口的王浆酸标准品纯度相当。此方法能变废为宝, 增加经济效益与社会效益。应用提取法生产王浆酸操作简单, 但因王浆酸在王浆中含量很少, 况且变质废弃的蜂王浆毕竟数量不多, 因此不适宜于大规模生产, 而且还需用大量有机溶剂, 成本较高。
参考文献:
[1]彭川,张琦,苟绍华等. 王浆酸的高效液相色谱分析及抑菌活性研究 [J]. 应用化工, 2017, 46 (12): 2485-2487+2491. DOI:10.16581/j.cnki.issn1671-3206.20170928.003
[2]刘斌,吴文珠. HPLC法测定蜂王浆冻干粉中王浆酸的含量 [J]. 黑龙江医药, 2006, (06): 433-434.
[3]汪多仁. 王浆酸的开发与应用进展 [J]. 养蜂科技, 2004, (04): 6-10.