本文将介绍杆菌肽含量测定的方法，以便准确、可靠地确定杆菌肽的含量。
简述：杆菌肽（Bacitracin）是一类由非核糖体肽合成酶（Nonribosomal peptide synthetase, NRPS）催化合成的环状多肽抗生素。地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）是杆菌肽的主要生产宿主。
随着科学的不断进步，人们对杆菌肽特性的了解也越来越深入，杆菌肽的应用必将会随着研究的不断深入而更加广泛。国外杆菌肽定量测定方法常采用微生物检定法，如管碟法、浊度法以及高效液相色谱定量测定法，且这些方法均已被国际药典和各国药典收录。国内常用的方法参考药典，有管碟法、浊度法等。
含量测定：
1. HPLC结合组分制备对杆菌肽中有关物质及有效组分含量测定
张含智等人建立基于HPLC结合组分制备对杆菌肽中有关物质及有效组分含量测定的分析方法。方法为：采用Agilent HPLC，选择Diamonsil Plus C1 8 色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，以50 mmol·L－1 甲酸铵溶液(p H经甲酸调至4.0)为流动相 A，乙腈为流动相B，流速为1 m L·min－1 ，线性梯度洗脱，检测波长为254 nm。HPLC条件与溶液配制具体为：
（1 ）HPLC条件
按《美国药典》40版中杆菌肽的有关物质的分析方法，选择Diamonsil Plus C1 8 色谱柱(4.6 mm× 250 mm，5μm)，以磷酸氢二钾、磷酸二氢钾-甲醇- 乙腈为流动相，流速为1 m L·min－1 ;柱温为30℃; 进样量为20μL;检测波长为254 nm。在组分制备过程中，进样量调整为100μL。
实验中以50 mmol·L－1 甲酸铵溶液(用甲酸调节pH值至4.0)为流动相A，乙腈为流动相B，按表2线性梯度洗脱，流速为1 m L·min－1 ;柱温为30 ℃;进样量为20μL;检测波长为254 nm。
（2）溶液配制
精密称取杆菌肽锌对照品及杆菌肽锌供试品 20 mg，置10 mL量瓶中，加乙二胺四乙酸二钠(ED TA-2Na)溶液(40 g·L－1，pH经氢氧化钠溶液调至 7.0)溶解并定量稀释至刻度，摇匀。杆菌肽原料药供试品用水-乙腈(77∶23)溶解，其他同于杆菌肽锌。杆菌肽原料药制备溶液质量浓度为15 mg·m L－1 ，进样量为100μL。
该液相分析方法可同时测定杆菌肽中的有关物质及有效组分含量，适用于该产品的质量控制。
2. 基于比浊法的杆菌肽定量测定
杆菌肽在研究应用过程中，定量测定方法不统一，结果缺乏参考性。为规范其测定方法，王志新等人通过建立杆菌肽浓度，对数值与OD6 00之间的线性关系，以重复性和精密度为指标，优化指示菌初始浓度、杆菌肽溶液与菌悬液的比例、培养时间等因素，确定比浊法测定杆菌肽抑菌活性的方法。结果显示，比浊法的最适测定条件为：指示菌初始浓度107 CFU/mL，杆菌肽溶液与菌悬液比例1∶9，培养时间4 h，在此条件下，线性关系良好，R2达到0.99以上，且具有良好的重复性。进一步选用大肠杆菌ATCC 44752和金黄色葡萄球菌ATCC 25923进行研究，结果重复性好，精密度高。研究结果将为比浊法的进一步应用以及杆菌肽在试验和生产过程中的定量测定提供参考和依据。
参考文献：
[1]吴志勇. 杆菌肽A合成机制及其NRPS功能结构域研究[D]. 江南大学, 2022. DOI:10.27169/d.cnki.gwqgu.2022.002312.
[2]王志新,刘洋,周景波等. 基于比浊法的杆菌肽定量测定方法优化 [J]. 生物技术通报, 2020, 36 (05): 92-97. DOI:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0994.
[3]张含智,秦峰,刘浩. HPLC结合组分制备分析杆菌肽中的有关物质及有效组分含量 [J]. 中国药学杂志, 2018, 53 (23): 2041-2046.
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