生物医学工程

心肌细胞作为原代细胞是不太好转染么?

最近在做心肌细胞micRNA inhibitor转染的实验，苦于自己从没做过实验，都是现学现做，按照说明书摸索转染浓度，结果转染24和48小时后，inhibitor组比阴性对照组的micRNA表达都高，另外，自己做的是探针法realtime PCR，结果micRNA CT值都在33-35之前，内参基因u6 CT值在20左右，有人说基因表达太低，结果不准确，我想问一下，心肌细胞作为原代细胞是不太好转染么？如果真是micRNA表达太低，有什么处理办法呢？

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共5个回答

橘子是只喵~，~ 2022-02-12回答

原代细胞不好转，可以试试专门转原代细胞的转染试剂，英格恩有专门转原代细胞的试剂。https://www.engreen.com.cn/product/rna%e8%bd%ac%e6%9f%93%e8%af%95%e5%89%82/

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小花妹妹。小，工艺技术员 2019-03-09回答

1.CT值如果大于30，基本上是不太可信的。一是表达量太低，二是做阴性对照有时候也可以扩出来CT值这么大的。2.原代细胞一般都不太好转染。3.如果真的是miRNA表达很低，那么你做inhibitor就没有意义了。因为本身就很低了，你再去干扰，效果不会很明显。要么换细胞，要么做过表达看看。
转染试剂要给力。lipo2000什么的不太能转原代！

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长夜忽临一场，安装预算工程师 2019-03-09回答

建议找个带荧光的阳性对照micRNA inhibitor，看看转染率多少？如果转染效率没问题，考虑一下micRNA inhibitor，可以用ambion品牌的试试

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泡芙，技术开发工程师 2019-03-09回答

ipo RNAimax还可以，但是不知道心肌细胞咋样。另外，RNA要防止降解。
没换OPTI用不加血清抗生素的DMEM也可以啊，这没关系的。

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然后呢，后来，工艺专业主任 2019-03-09回答

不是提取的RNA，是转染的时候，你的inhibitor本身就是RNA，就需要小心操作。
提取RNA时用的 EP管应该也是不含RNA酶的，不能自己高压灭菌。
我们有做巨噬细胞的原代，也很难转染，提RNA用Trizol

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