布格替尼的生物活性及实验方法？ ¹

布格替尼是一种用于治疗非小细胞肺癌的癌症药物，它可以干扰体内癌细胞的生长和扩散。作为一种有效的、选择性的ALK抑制剂，布格替尼的IC50值为0.6 nM。

布格替尼的体外生物活性

1）体外生物活性： 布格替尼在体外可以有效抑制ALK的激酶活性，对包括G1202R在内的所有五种突变体变体的抑制效果都很好（IC50值为0.6-6.6 nM）。此外，布格替尼还表现出高度的选择性，只对其他11种激酶表现出抑制作用（IC50值<10 nM），包括ROS1、FLT3、FLT3（D835Y）和EGFR（L858R; IC50值为1.5-2.1 nM）的突变体变体。布格替尼对于EGFR的活性较为适度，对T790M抗性突变（L858R / T790M）、天然EGFR、IGF1R和INSR的抑制效果较弱（IC50值为29-160 nM），并且对MET没有显著的抑制作用（IC50值>1000 nM）。在细胞实验中，布格替尼对ALK和ROS1的抑制效果分别为14和18 nM。此外，布格替尼对于FLT3和IGF-1R的抑制效果较弱（IC50值为148-158 nM），对FLT3和EGFR的突变体变异的抑制效果也较弱（IC50值为211-489 nM）。布格替尼还可以抑制三种ALK阴性ALCL和NSCLC细胞系的生长，其GI50值范围为503至2,387 nM。此外，布格替尼还可以抑制ALK成瘾的神经母细胞瘤细胞系的增殖，其IC50值为75.27±8.89 nM。布格替尼还可以分别以10和4 nM的水平抑制ALK-I1171N和ALK-G1269A突变受体。除了对ALK、IGF1R和InsR的抑制作用外，布格替尼还可以有效抑制FLT3和ROS1的活性，其IC50值分别为2.1和1.9 nM。布格替尼对于c-Met或Ron没有显著的活性。布格替尼可以克服EGFR三重突变体的耐药性，其活性主要通过ATP竞争性方式发挥作用，对野生型EGFR的影响较小。 2）体内生物活性： 布格替尼在体内可以剂量依赖性地抑制ALK阳性Karpas-299（ALCL）和H2228（NSCLC）异种移植小鼠模型中的肿瘤生长。与克唑替尼相比，布格替尼可以显著增强携带ALK阳性脑肿瘤的小鼠的存活率。布格替尼在体内可以剂量依赖性地抑制肿瘤活性，在NSCLC小鼠模型中可以导致肿瘤消退。口服给药后，布格替尼在小鼠体内的药代动力学参数为：Cmax = 448ng/mL，t1/2 = 5.8h。在CD大鼠中，静脉给药后的药代动力学参数为：CL = 0.46L/(h·kg)，t1/2 = 4.8h，Vss = 7.8L/kg；口服给药后的药代动力学参数为：Cmax = 305ng/mL，tmax = 4h，t1/2 = 3.4h，F％= 52。布格替尼具有剂量依赖性的抗肿瘤活性。在PC9三重突变体异种移植模型中，布格替尼显示出生长抑制活性，并且与抗EGFR抗体结合，可以增强体外和体内的药效，特别是对于第一代EGFR-TKI抗性患者。

生物活性实验方法

1）动物实验： 使用8至10周龄的雌性SCID/米色小鼠进行实验。对于H3122细胞模型，每只小鼠静脉注射5×106个H3122细胞，当平均肿瘤大小达到300mm3时，随机选择治疗组（n = 10），开始口服给药，每天一次，连续21天。对于Karpas-299细胞模型，每只小鼠皮下注射2.5×106个Karpas-299细胞，当平均肿瘤大小达到约180mm3时，随机选择治疗组（n = 10），开始口服给药，每天一次，连续14天。每周测量皮下肿瘤的大小。通过计算公式（L×W2）/ 2来计算肿瘤体积（以mm3计）。当肿瘤达到宿主体重的10％时，使用CO2窒息的方式使动物安乐死。 2）细胞实验： 将每孔15,000个细胞接种到细胞培养板中，并连续稀释所需的抑制剂。72小时后，使用刃天青评估细胞的活力。通过将数据拟合至log（抑制剂浓度）对标准化响应（可变斜率）方程，使用GraphPad Prism 6.0计算IC50值。每个实验都进行两次，并重复至少三次。 3）激酶实验： 进行了289种激酶的体外HotSpotSM激酶谱分析。该测定在10μM[33P]-ATP存在下进行，使用浓度范围为0.05nM至1μM的布依他尼。