本文旨在探讨合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺的方法。通过深入研究这一合成过程，有望为相关领域的发展提供见解和启发。
背景：度洛西汀，化学名：(S)-N-甲基-3-(1-萘氧基)-3-(2-噻吩基)-1-丙胺，商品名为Cymbalta，是一种有效的5-羟色胺及去甲肾上腺素再摄取抑制剂（SNRI）。临床上，其盐酸盐用于治疗重症抑郁症、糖尿病性外周神经疼痛及女性应激性尿失禁。在两种同分对映异构体中，只有(S)-构型具有抗抑郁的药理活性，这两种异构体具有相同的化学组成。
目前，由于起始原料不同，不对称合成手性度洛西汀的方法很多[ 2]。其中，(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺（DHTP）是制备度洛西汀的重要手性中间体，因而通过(S)-专一性不对称还原N,N-二甲基- 3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺（DKTP）已成为高效制备度洛西汀的一种重要途径。
合成
1. 方法一：
（1）培养基和菌体培养
LB液体培养基:蛋白胨10.0 g/L+NaCl 10.0 g/L+酵母提取物5.0 g/L(固体培养基添加15～ 25 g/L琼脂粉)。
将E．coli BL21/p ET21c-cr2接种到含氨苄青霉素(100μg/mL)的5 mL LB液体培养基中，于37℃ 和200 r/min条件下培养8 h，然后转接到含氨苄青霉素(100μg/mL)的500 mL LB液体培养基中，于 37℃和200 r/min条件下振荡培养至OD6 00 为0.6～0.8时，向培养基中加入IPTG(0.1 mmol/L)，于 17℃和200 r/min条件下诱导表达14 h．
（2） CR2重组酶液的制备
将诱导表达后的发酵液于6300 r/min转速离心15 min，收集菌体，并用0.9%的NaCl水溶液洗涤 2～3次，重新悬浮于三乙醇胺-盐酸缓冲液(TEA-HCL，0.1 mmol/L，p H=7.6)中，超声破碎细胞。破碎条件:工作时间2 s，间歇时间3 s，总工作时间15 min。于4℃下以12000 r/min转速离心30 min，收集上层清液并用0.22μm水系滤膜过滤，即得粗酶液。
（3） CR2重组酶体系的构建
由TEA缓冲液(0.1 mol/L)、适量粗酶液、DKTP(10 g/L)、葡萄糖(100 g/L)和NADP+ (0.2 mmol/L)组成10 mL反应体系，于30℃和200 r/min条件下反应12 h。反应结束后，离心取上层清液，用2倍体积的乙酸乙酯萃取，有机相用HPLC仪分析产物产率及光学纯度。
2. 方法二：
（1）重组菌株的构建和菌体培养
使用在线分析软件NCBI（http：//blast.ncbi. nlm.nih.gov/Blast.cgi）利用C. parapsilosis基因组数据库（http：//www.sanger.ac.uk/sequencing/Candida/ parapsilosis/）在C. parapsilosis CCTCC M203011中挖掘得到8个同源醛酮还原酶序列，见表。设计引物扩增获得醛酮还原酶编码区基因， 构建重组质粒pET21c，将重组质粒转化到E.coli BL21 (DE3) 感受态细胞中进行活性表达。
重组大肠杆菌在含50μg/mL氨苄青霉素的LB培养基中于37℃、200r/min 振荡培养至OD6 00 达到 0.6~0.8，加IPTG至终浓度为0.1mmol/L，于17℃、 200r/min 诱导表达12h。
（2）粗酶液的制备
将诱导表达后的发酵液于8000r/min离心 10min收集菌体，用生理盐水洗涤3次，重悬于 0.1mol/L磷酸钾缓冲液（pH=6.5）中（细胞浓度为 100g/L），超声波破碎细胞。破碎条件：工作时间1s，间隔时间3s，总工作时间5min。4℃的条件下 12000r/min 离心15min，收集上清液作为粗酶液用 于不对称催化反应。
（3）酶促不对称还原DKTP合成 (S)-DHTP
2mL磷酸钾缓冲液（0.1mol/L，pH=6.5）中含有1mL粗酶液（总蛋白含量5mg）及5g/L DKTP、辅助底物糖（醇）（10g/L）、NADPH（0.1mmol/L）和NADP+（0.1mmol/L），置于30℃、200r/min的摇床中L反应24h。反应结束后，加入2倍体积乙酸乙酯萃取，有机相用高效液相色谱仪分析产物光学纯度及产率。
参考文献：
[1]孙太强,李斌,聂尧等. 羰基还原酶CR2重组酶体系不对称合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺 [J]. 高等学校化学学报, 2017, 38 (10): 1772-1777.
[2]郭荣云,聂尧,穆晓清等. 新型醛酮还原酶不对称转化制备(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺 [J]. 化工进展, 2014, 33 (09): 2344-2349.
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