双荧光素酶被广泛应用于验证MIRNA与靶目标基因结合位点的研究。作为理想的报告基因，双荧光素酶在哺乳动物细胞中没有内源性表达，因此可以通过转录完成后立即产生功能性的荧光素酶。与单一报告基因实验相比，双报告基因实验通过共转染的“对照”作为内参，为实验提供一个基准线，从而最大程度上减小实验条件、细胞活性和转染效率等外在因素对实验结果的影响，使得数据更可靠。Dual-Luciferase双荧光素酶报告基因检测系统可以同时表达萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，因此不会产生交叉干扰。通过双荧光素酶报告基因系统，可以有效验证miRNA与靶目标基因结合位点、转录因子和启动子结合位点。
miRNA主要通过作用于靶基因的3'UTR发挥作用。可以将目的基因的3'UTR区域构建到载体中报告基因luciferase的后面，通过比较过表达或干扰miRNA后，观察报告基因表达的改变（通过监测荧光素酶的活性变化），从而定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。此外，还可以通过定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3'UTR的作用位点。本实验的目的是验证hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3'UTR是否发生作用，并进一步确定hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3'UTR的作用位点。
[1] 印翠，张俊玲，施志仪，孙文慧，孙近近。应用于miRNA靶标检测的双荧光素酶报告载体的构建及鉴定。《生物技术通报》2015年 第12期。
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