荧光素酶报告基因的应用原理是什么? ¹

荧光素酶报告基因是一种利用荧光素作为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的报告系统。荧光素酶能够催化荧光素氧化成氧化荧光素，从而产生生物荧光。

双荧光素酶报告基因系统也是一种利用荧光素作为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的报告系统。荧光素酶能够催化荧光素氧化成氧化荧光素，从而产生生物荧光。通过荧光测定仪可以测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素酶和荧光素这一生物发光体系可以高效地检测目的基因的表达，是一种检测转录因子和目的基因启动子区DNA相互作用的方法。

荧光素酶报告基因的应用原理是什么？

（1）将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒中，如pGL3-basic等。

（2）将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其他相关的细胞系。如果此转录因子能够激活靶启动子，则荧光素酶基因就会表达，荧光素酶的表达量与转录因子的作用强度成正比。

（3）加入特定的荧光素酶底物，荧光素酶与底物反应，产生荧光。通过检测荧光的强度可以测定荧光素酶的活性，从而判断转录因子是否能与此靶启动子片段有作用。

主要参考文献

[1]朴英实，林贞花主编,分子病理生物学实验技术指南,人民军医出版社,2015.05,第187页。