本文旨在探讨2’-脱氧胞苷的合成方法，为相关领域的研究提供参考和思路。
简介： 2’-脱氧胞苷（dCyd）作为一类重要的药物中间体，能够用于合成吉西他滨（dFdC）、扎西他滨（ddC）等多种抗病毒或抗肿瘤的药物。随着医药工业与生物技术的长足发展，为了满足原料市场对高纯度脱氧胞苷日益增大的需求，成本低廉、操作简单、质量稳定的脱氧胞苷生产工艺被逐渐重视起来。
合成：
1. 方法一：
（1）{(2R，3S)-3-［(4-对氯苯甲酰基)氧］-5-甲氧基呋喃-2-基}基4-氯苯甲酸(Ⅴ)的合成
向反应釜中加入α-D-2-脱氧核糖Ⅱ(6.7 kg，50 mol)和甲醇(100 L)，0℃下30 min内滴加乙酰氯 (0.3 L)。将此澄清溶液恢复到室温，并于室温下搅拌2 h。然后将吡啶(10 L)加入到反应液中，室温搅拌2 h。溶剂通过减压蒸馏的方法除去，得到的黏稠液体重新溶解于30 L的吡啶中，将其冷却到0℃，加入4-二甲氨基吡啶(DMAP，122.2 g，1 mol)，在1 h内滴加4-氯苯甲酰氯(14 L，110 mol)。滴加完成后，反应液慢慢恢复到室温，并于室温搅拌过夜(约 14 h)。加入100 L冷水淬灭反应，用二氯甲烷(2×100 L)萃取水相，合并有机相，分别用饱和碳酸氢钠溶液(50 L)和1 mol/L的盐酸(100 L)洗涤，用无水 硫酸钠干燥，再减压除去溶剂，得到棕红色的黏稠液体。加入乙醚(75 L)，过滤除去固体，母液减压浓缩，并用甲苯(30 L)共沸除水得到Ⅴ的粗品(20 kg)。
（2）(2R，3S，5R)-5-氯-2-{［(4-对氯苯甲酰基)氧］甲基}呋喃糖-3-基-4-氯苯甲酸(Ⅵ)的合成
向上步所得到的中间体Ⅴ的粗品中分别加入乙醚(20 L)和冰醋酸(50 L)，并将所得到的溶液冷却至0℃。干燥的氯化氢气体对体系内鼓泡，随着反应的进行体系内会不断地析出白色固体。大约20 min后，停止鼓泡。在此温度下过滤得到白色晶体，并用正己烷洗涤。所得到的固体通过真空干燥得到 化合物Ⅵ(白色晶体，17.6 kg，收率为82%)。
（3）脱氧尿苷(Ⅷ)的合成
向反应釜中先后加入尿嘧啶(15.0 kg，134 mol)，硫酸铵(175 g，1.32 mol)和六甲基二硅氮烷 (NMDS，64.8 kg，402 mol)，并加热至回流，保持2 h。然后冷却反应液，并通过减压浓缩，得到粗品Ⅶ 溶解于氯仿(600 L)中。然后将化合物Ⅵ(47.5 kg， 46 mol)加入到此溶液中，反应液加热至回流保持3 h，然后停止加热。用饱和的碳酸氢钠水溶液(500 L)淬灭反应，分离有机相并浓缩。用甲醇重结晶，过滤得到的固体经过真空干燥即为脱氧尿苷Ⅷ(白色晶体，45.9 kg，收率为95%)。
（4） 2'-脱氧核糖胞苷(Ⅰ)的合成
向反应釜中依次加入脱氧尿苷Ⅷ(23.0 kg， 45.5 mol)，乙腈(100 L)，三乙胺(9.63 kg，95 mol) 和1-甲基哌啶(5.42 kg，54.7 mol)。将此溶液冷却 至0℃，于60 min内滴加对甲苯磺酰氯(18.1 kg，95 mol)的乙腈溶液(50 L)。在此温度下搅拌3 h后，将体积分数为25%的氨水(20 L)直接加入到反应 釜中，使反应体系慢慢恢复到室温，搅拌过夜(约14 h)。然后再回流4 h，冷却至室温后，得到大量的白色沉淀。过滤后用乙腈洗涤固体，随后用甲醇在0 ℃下重结晶，把得到的固体真空干燥得到脱氧胞苷Ⅰ(白色粉末，17.2 kg，收率为56%)。熔点:207～ 209℃(脱氧胞苷盐酸盐熔点:165～166℃)。
2. 方法二：
采用ZYM-Fe-5052自诱导培养基对含有N-脱氧核糖转移酶II（NDT）的大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导，所得完整菌体直接用于催化合成dCyd。自诱导系统不仅无需额外添加诱导剂，还能够达到较高的菌体密度，且与LB诱导系统所得菌体在合成dCyd方面具有同样高效的催化活性。2’-脱氧胸苷（dThd）和胞嘧啶的浓度比为1∶3时，产物转化率可高达86.5%。合成dCyd的最适反应条件为：2’-脱氧胸苷（dThd）和胞嘧啶的浓度比为1∶1.5，pH6.5的磷酸缓冲液， 1 mg/mL的菌体量，终体系10 mL，30℃条件下反应1 h，产物转化率可达71.9%。此方法还可用于制备其他核苷类似物，具有广泛的适用性和应用前景。
参考文献：
[1]李江南,李金岭,李明等. 2'-脱氧胞苷的合成工艺 [J]. 精细化工, 2016, 33 (09): 1020-1022+1068. DOI:10.13550/j.jxhg.2016.09.011
[2]王玺,段胜林,熊舒莉等. 自诱导系统在酶促合成2’-脱氧胞苷中的应用 [J]. 生物技术通报, 2014, (11): 225-232. DOI:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2014.11.034
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