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小鼠抗GAPDH单克隆抗体的应用及检测原理? 1

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小鼠抗GAPDH单克隆抗体是一种能够特异性结合GAPDH的鼠源单克隆抗体,主要用于多种免疫学实验,如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。

检测原理:采用双抗体夹心法来测定样本中的GAPDH水平。首先,在微孔板上包被纯化的GAPDH抗体,形成固相抗体。然后,依次加入样本中的GAPDH和与HRP标记的GAPDH抗体结合的复合物,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后,加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,然后在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的GAPDH浓度成正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中GAPDH浓度。

GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个关键酶,在各种组织的细胞中广泛分布。

GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量约为146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因在几乎所有组织中都高水平表达,被广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。由于GAPDH作为管家基因在同种细胞或组织中的蛋白质表达量一般是恒定的,因此在使用GAPDH内参抗体时,可以将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除,得到每个样品目的蛋白的相对含量,然后再进行样品与样品之间的比较。

小鼠抗GAPDH单克隆抗体在海洋鱼类细菌性病原微生物研究中的应用

用于海洋鱼类细菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究

在对海洋鱼类病原微生物GAPDH蛋白的定位研究中,成功克隆了六种病原菌GAPDH编码基因,并在大肠杆菌中实现了这六个基因的重组表达。随后,制备了迟钝爱德华氏菌EIB202重组蛋白GAPDH的多克隆抗体。通过Western blotting、间接免疫荧光观察和流式细胞仪分析等方法,发现所选取的六种鱼类重要病原菌(迟钝爱德华氏菌、鲶鱼迟钝爱德华氏菌、嗜水气单孢菌、鳗弧菌、溶藻弧菌和哈维氏弧菌)中的GAPDH蛋白均向胞外分泌,并且在细胞表面也有分布。

通过对斑马鱼进行的实验发现,来自不同病原菌的重组蛋白均具有明显的免疫保护作用,并且它们之间存在一定的交叉免疫保护。最后,研究了迟钝爱德华氏菌EIB202的GAPDH过表达菌株对EPC细胞的侵染能力,结果发现GAPDH与病原菌的黏附存在一定的相关性。这些研究结果为将来利用GAPDH蛋白作为广谱型保护性抗原蛋白,开发针对养殖水体多病原的亚单位疫苗提供了优选靶标,并为进一步研究迟钝爱德华氏菌中GAPDH蛋白在鱼类致病机制中的功能奠定了基础。

参考文献

[1]QseBC controls flagellar motility,fimbrial hemagglutination and intracellular virulence in fish pathogen Edwardsiella tarda[J].Xin Wang,Qiyao Wang,Minjun Yang,Jingfan Xiao,Qin Liu,Haizhen Wu,Yuanxing Zhang.Fish and Shellfish Immunology.2011(3)

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[3]A novel multivalent vaccine based on secretary antigen-delivery induces protective immunity against Vibrio anguillarum and Aeromonas hydrophila[J].Lingyun Zhou,Xiuhua Wang,Qin Liu,Qiyao Wang,Yan Zhao,Yuanxing Zhang.Journal of Biotechnology.2010(1)

[4]Characterization of OmpK,GAPDH and their fusion OmpK–GAPDH derived from Vibrio harveyi outer membrane proteins:their immunoprotective ability against vibriosis in large yellow croaker(Pseudosciaena crocea)[J].C.Zhang,L.Yu,R.Qian.Journal of Applied Microbiology.2007(5)

[5]李小勇.海洋鱼类细菌性病原微生物GAPDH蛋白的定位和功能初步研究[D].华东理工大学,2011.

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