本文将讲述有关检测3-甲基黄酮-8-羧酸的研究有哪些，旨在为相关领域的研究人员提供参考依据和实验支持。
背景：3-甲基黄酮-8-羧酸，英文名称：3-methylflavone-8-carboxylic acid，CAS：3468-01-7，分子式：C17H12O4，外观与性状：白色结晶固体。盐酸黄酮哌脂口服吸收后迅速被代谢，而以其活性代谢物3-甲基黄酮-8-羧酸（3-methylflaveone-8-carboxylic acid，MFCA）为主要存在形式。文献用UV法、 GC法、毛细管电泳法、HPLC法检测血浆及尿中MFCA浓度及 UV法测定盐酸黄酮哌酯片剂含量。
检测：
1. 方法一：
张芸芸等人通过20名健康 受试者单次口服盐酸黄酮哌酯200 mg，用高效液相色谱(HPLC)法测定血浆中 3－甲基黄酮－8－羧酸(3－methylflanone－8－carboxylic acid，MFCA)浓度，用 DAS 2.1.1软件计算药代动力学参数。建立的HPLC法灵敏准确，操作简便，适用于 MFCA血药浓度检测及盐酸黄酮哌酯药代动力学研究。测定方法具体如下：
（1）色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18 柱(250×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇－20 mmol·L－1磷酸二氢钾缓冲液(pH:2.5)=70:30;流速:1.00 m L·min－1;柱温:35℃;进样量:20μL;检测波长:310 nm。
（2）血浆样品处理
精密量取血浆样本0.50 mL，加 入甲醇0.10 mL，加入内标工作液0.10 m L和1 mol·L－ 1 HCL溶液0.10 mL后混匀。加入乙酸乙酯 3.00 mL。所有样品涡旋混匀2 min并在3500 r·min－1 条件下离心10 min，吸取有机层于另一离心试管中，于50℃水浴通氮气吹干，残渣加入甲醇80 μL溶解，取20μL进样分析。
2. 方法二：
沈丹丹等人建立测定盐酸黄酮哌酯原料及制剂中有关物质的高效液相色谱(HPLC)法，考察6个厂家产品的真实杂质水平。方法为：色谱柱采用Phenomenex Luna C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，流动相为缓冲液(取1 g己烷磺酸钠，加水适量使溶解，加三乙胺1 m L和磷酸 1 m L，加水稀释至650 m L，摇匀)－乙腈(65∶35)，梯度洗脱，流速为1.0 m L/min，检测波长为293 nm，柱温为30℃。结果为：盐酸黄酮哌酯、3－甲基黄酮－8－羧酸(杂质A)、杂质B、杂质C、杂质D依次出峰，各峰间分离度均大于1.5; 3－甲基黄酮－8－羧酸(杂质A)，B，C，D及盐酸黄酮哌酯质量浓度分别在0.292 2～ 5.844 0，0.306 3～6.126 0，0.308 7～6.173 8，0.321 2～6.423 2，0.108 1～2.162 0μg/m L范围内与峰面积线性关系良好;杂质A，B， C，D平均回收率分别为98.92%，99.11%，100.04%，99.48%，ＲSD分别为0.62%，1.34%，1.02%，1.43%(n=6)，校正因子分别为 1.5，1.4，1.3，1.2。该方法灵敏度高，分离效果好，能同时测定盐酸黄酮哌酯中几种工艺杂质和降解杂质。
3. 方法三：
黄英建立血浆中黄酮哌酯活性代谢物MFCA浓度测定的HPLC法。具体为：血浆样品经碱化、水解及酸化后,用乙酸乙酯提取。以甲醇-20mmol/LKH2PO4(70∶30)为流动相,紫外310nm检测。结果:线性范围0.25～32μg·ml-1,萃取回收率96.1%～100.3%。加样回收率96.8%～104.0%,日内RSD0.52%～2.30%,日间RSD1.39%～2.97%。该法准确可靠,用于盐酸黄酮哌酯人体药动学研究取得良好结果。测定方法具体如下：
（1）色谱条件
国产 YWG ODS（250 mm×4．6 mm，10 μm）分析柱；流动相为甲醇-20 mmol·L－1 KH2PO4（70∶30），磷酸调缓冲液pH至2.5，流速1.3 ml·min－1； 检测波长310 nm。
（2）血样处理
取空白血浆200 μl，加入MFCA对照溶液100 μl（或待测血浆200 μl，加水100 μl）、0.25 mol·L－1 NaOH100 μl，于60℃保温水解10 min。再加入1 mol·L－1 HCl100 μl及内标工作液100 μl（含6 MNA10 μg），用乙酸乙酯1.5 ml混旋萃取5 min， 3 000 r·min－1离心5 min。将有机相转入离心管， 置50℃水浴通空气流挥干。残渣用流动相60 μl溶解，进样20 μl，在前述色谱条件下分离测定。
参考文献：
[1]张芸芸,王殿文,赵恒利等. 盐酸黄酮哌酯片在健康人体的药代动力学研究 [J]. 中国临床药理学杂志, 2020, 36 (12): 1694-1696. DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2020.12.025
[2]沈丹丹,曾杰,梁涵雁等. 高效液相色谱法测定盐酸黄酮哌酯原料和制剂中有关物质 [J]. 中国药业, 2018, 27 (05): 16-21.
[3]黄英,余勤,梁茂值等. HPLC法测定人血浆中黄酮哌酯活性代谢物MFCA的浓度 [J]. 华西药学杂志, 2000, (01): 9-11. DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2000.01.004
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