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如何使用RED BLOOD CELL LYSIS BUFFER进行红细胞裂解? 1

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RED BLOOD CELL LYSIS BUFFER是一种方便快捷的去除红细胞的方法。它可以裂解红细胞而不会对有核细胞造成损伤,并且可以完全去除红细胞。红细胞裂解液通常用于分离纯化经酶消化分散的组织细胞、淋巴细胞,以及提取组织细胞蛋白和核酸等实验中的红细胞。

红细胞裂解液通过裂解红细胞,可以得到不含红细胞的组织细胞。这些组织细胞可以进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸和蛋白的分离和提取等实验。

红细胞裂解液的主要成分是氯化铵。氯化铵的氨根离子不能通过细胞膜,而其他离子可以通过细胞膜,从而在细胞内外形成离子浓度差异,产生渗透压差。这会导致细胞膨胀并最终裂解。

使用RED BLOOD CELL LYSIS BUFFER进行红细胞裂解的步骤是什么?

1. 首先,取新鲜的抗凝血,离心并弃去上清液。

2. 取出预先冷藏的4℃ RED BLOOD CELL LYSIS BUFFER,按照1:6-10的比例将其加入细胞沉淀中(即每1ml细胞压积加入6-10ml裂解液),轻轻吹打混匀。

3. 以800-1000rpm的速度离心5-8分钟,然后弃去上层的红色清液。

4. 收集沉淀部分,加入Hank's液或无血清培养液进行2-3次离心洗涤。

5. 如果裂解不完全,可以重复步骤2和3。

6. 最后,重悬细胞,用于后续实验。如果需要提取RNA,最好从步骤4开始使用DEPC水配制的溶液。

RED BLOOD CELL LYSIS BUFFER的应用领域有哪些?

红细胞内血红蛋白相互作用的研究

通过免疫共沉淀联合血红蛋白释放实验,可以研究红细胞内血红蛋白的相互作用。该方法结合了红细胞血红蛋白电泳释放实验和免疫共沉淀技术,旨在寻找与血红蛋白相互作用的蛋白。

具体方法是将新鲜抗凝全血制备成红细胞悬液和溶血液,然后通过血红蛋白电泳释放实验分离得到不同类型的血红蛋白。接下来,使用hemoglobin β抗体通过免疫共沉淀的方法捕获血红蛋白相互作用的蛋白复合物,并通过SDS-PAGE进行分离。最后,使用质谱鉴定和免疫印迹验证结果。

该研究发现在人红细胞内,血红蛋白与硫氧还蛋白过氧化物酶2存在相互作用,而与其他类型的血红蛋白没有相互作用。

参考文献

[1] The novel role of peroxiredoxin-2 in red cell membrane protein homeostasis and senescence[J]. Alessandro Matté, Antonella Pantaleo, Emanuela Ferru, Franco Turrini, Mariarita Bertoldi, Francesca Lupo, Angela Siciliano, Chae Ho Zoon, Lucia De Franceschi. Free Radical Biology and Medicine. 2014.

[2] Hydrogen peroxide metabolism and sensing in human erythrocytes: A validated kinetic model and reappraisal of the role of peroxiredoxin II[J]. Rui Benfeitas, Gianluca Selvaggio, Fernando Antunes, Pedro M.B.M. Coelho, Armindo Salvador. Free Radical Biology and Medicine. 2014.

[3] Challenges for red blood cell biomarker discovery through proteomics[J]. Benjamin Barasa, Monique Slijper. BBA-Proteins and Proteomics. 2014(5).

[4] Contribution of membrane permeability and unstirred layer diffusion to nitric oxide-red blood cell interaction[J]. Prabhakar Deonikar, Mahendra Kavdia. Journal of Theoretical Biology. 2013.

[5] 安亮. 红细胞内血红蛋白相互作用的研究[D]. 内蒙古科技大学包头医学院, 2015.

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