在细胞复制DNA过程中,DNA聚合酶扮演着重要的角色。它以DNA为模板,从5’端开始复制DNA,一直到3’端。DNA聚合酶的主要功能是催化DNA的合成,并具有其他辅助活性。
耐热DNA聚合酶在PCR技术中得到广泛应用。不同种类的耐热DNA聚合酶都具有5’-3’聚合酶活性,但不一定具有3’-5’和5’-3’的外切酶活性。其中,3’-5’外切酶活性可以消除错配并切平末端,而5’-3’外切酶活性可以消除合成障碍。
超嗜热古菌Palaeo coccus pacificus DY20341是从东太平洋洋中脊热液区分离出来的,其基因组已经测序完成。预测结果显示,该古菌基因组中有2001个开放阅读框,其中78.11%的功能尚未确定。
尽管商业化的DNA聚合酶种类繁多,但针对不同扩增目的片段所需的特异DNA聚合酶体系仍然是必要的。
本发明旨在提供一种新型DNA聚合酶。
该DNA聚合酶的氨基酸序列如序列表中的序列4所示。
本发明的另一个目标是提供一种编码DNA聚合酶的基因。
此外,本发明还提供了一种重组表达载体,其中多克隆位点插入了编码DNA聚合酶的基因。
本发明的又一个目标是提供一种含有上述重组表达载体的重组菌。
其中,所述重组菌为大肠杆菌。
该DNA聚合酶可应用于PCR技术中。
本发明的又一个目标是提供一种获得目的基因的方法,包括以下步骤:
根据目的基因的序列设计引物,
以含有目的基因的DNA片段或基因组DNA为模板,利用设计的引物和DNA聚合酶进行PCR,
分离PCR产物以获得目的基因。