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什么是Taq DNA聚合酶? 1

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Abstart Taq DNA 聚合酶是一种与Taq DNA聚合酶混合的制品。在高温加热之前,抗Taq单克隆抗体与Taq聚合酶结合,从而抑制聚合酶的活性,以防止非特异性扩增。当扩增反应体系被加热到95℃ 2 min时,聚合酶活性会恢复,因此无需特殊失活处理,可以在常规PCR反应条件下使用。

聚合酶的基本性质与结构

聚合酶属于聚合酶I家族,是一种耐热的聚合酶。该酶的编码基因全长为2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白的分子量为94KD。酶比活性为200000U/mg。该酶具有高热稳定性,在95℃时酶活性半衰期为1.5小时;在70℃的高温下反应2小时后,仍能保持90%以上的活性;在75-80℃时活性最高,延伸效率约为每秒150个核苷酸。

Taq DNA聚合酶的结构包含三个结构域,如下图所示。

蛋白质肽链C端的第424-832个氨基酸构成了一个结构域,该结构域表达5'-3'聚合酶活性。这个结构域可以被比作人类的右手,包括手掌区域、拇指区域和手指区域。

其中,手掌区域是酶的催化位点,可以催化磷酰基转移。拇指区域与新合成的双链DNA的小沟相互作用,手指区域在模板的固定和核苷酸的特异性方面起重要作用。在合成反应中,引物-模板复合物首先结合于酶的拇指区域,然后手指区域与单链相互作用,并接纳dNTPs进行聚合反应。

参考文献

[1] Abstart抗体修饰热启动酶产品介绍

[2]Taq DNA 聚合酶的结构修饰与表征.郭佳

[3]Kreader CA.Relief of amplification inhibition in PCR with bovine serum albumin or T4 gene 32 protein[J].

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