通过测定NADPH在340nm处的OD值的减少量反应酶活力？

现在我在做一个体外实验NADPH是辅酶，为什么我的反应体系中没有加酶，只是加底物和NADPH，其OD值也在下降，这是为什么呢？我的反应体系体积200uL,NADPH的终溶度是0.5mM。请高手给我指教。

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共6个回答

其实就是氧化的问题存在，2-巯基乙醇是还原剂，减少氧化就行了
可是我的体系中加了DTT和PMSF

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我看过在缓冲液中加2-巯基乙醇的，2-巯基乙醇是什么原理能使NADPH的OD值变化小些？
NADPH在自然状态下容易被氧化分解，2-巯基乙醇是还原剂，可以减少氧化

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楼主可以试试加2-巯基乙醇试试，另外把空白的变化值减掉

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非常感谢你的帮助。
你好，请问你的问题解决了吗？我现在测GOGAT酶活也是遇到这个问题。我也是测NADPH的OD减少量，但是空白组和反应组的OD值都下降，而且速率几乎一样

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我看过在缓冲液中加2-巯基乙醇的，2-巯基乙醇是什么原理能使NADPH的OD值变化小些？

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其实就是氧化的问题存在，2-巯基乙醇是还原剂，减少氧化就行了

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