本文介绍了如何使用3-氟-4-氨基苯甲酸来合成蓝萼甲素生物素标记物。
简述：3-氟-4-氨基苯甲酸，英文名称：4-Amino-3-fluorobenzoic Acid，CAS：455-87-8，分子式：C7H6FNO2，密度：1.43 g/cm3。3-氟-4-氨基苯甲酸可用于合成蓝萼甲素生物素标记物。
蓝萼甲素是唇形科香茶菜属植物蓝萼香茶菜提取出来的二萜化合物，是蓝萼香茶菜中的主要活性成分。近年来，对此种二萜类化合物抑制肿瘤，抗病毒抑菌，对心血管系统保护及抗癌活性研究，已经成为当代天然药物化学的研究热点之一。而生物素-亲和素系统是一种具有高亲和力、灵敏度高、特异性强和稳定性好的信号放大标记技术，由于该标记技术具有优秀的性质，因此很快渗透到很多个学科，在细胞和抗原的定位和检测有相当重要的作用。
应用：合成蓝萼甲素生物素标记物。
李显伦的等人对生物素与6-氨基己酸、3-氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸、4-氨基-3-甲基苯甲酸、3-氟-4-氨基苯甲酸反应得出5种不同的生物素延长链，生物素与6-氨基 己酸延长后再次与6-氨基己酸反应形成第6种生物素延长链。然后生物素以及6种不同生物素延长链与蓝萼甲素进行酯化反应。一共得出14个不同的蓝萼甲素生物素标记。并且对部分蓝萼甲素生物素标记物进行体外抗肿瘤活性测试，初步得出了抗肿瘤活性较好的蓝萼甲素生物素标记物。
方法为：生物素先与氯甲酸异丁酯在三正丁胺的作用下反应10min，再与相应的氨基苯甲酸反应，其中与对氨 基苯甲酸反应生成的化合物21，与间氨基苯甲酸反应生成的化合物22，与4-氨基-3- 甲基苯甲酸反应生成的化合物23，与3-氟-4-氨基苯甲酸反应生成的化合物24，反应路线如下图。
4-氨基-3-氟苯甲酸生物素基甲素的制备具体步骤如下：
（1）N-(+)-Biotinyl-4-amino-3-fluorobenzoic acid的制备(化合物24)
在100ml的圆底烧瓶加入500mg生物素，并加入0.64ml三正丁胺以及40ml DMF， 搅拌溶解后加入0.32ml氯甲酸异丁酯，在室温下反应10min后，将混合物缓慢地在5℃环境下加入到40ml含548mg 4-氨基-3-氟苯甲酸的DMF溶液中，在5℃下搅拌2小时后将溶剂旋干，将粗沉淀物溶于36ml温热的50%乙醇水溶液中，并将混合物以2.0 当量的盐酸调节pH=2.0，在0℃下放置12h后将沉淀过滤并用水洗涤后在真空下干燥。得到白色固体465mg。产率62.4%。
（2）4-氨基-3-氟苯甲酸生物素基甲素的制备
在50ml的圆底烧瓶中如入332mg蓝萼甲素、458mg化合物24、383mg EDCI、 122mg DMAP以及20ml DMF溶液，在常温下反应24h后旋干，过硅胶柱层析，用氯仿－甲醇(201)洗脱，得到4-氨基-3-氟苯甲酸生物素基甲素混合物190mg，然后以反相制备液相分离，用67%甲醇：33%水洗脱，得到7-(4-氨基-3-氟苯甲酸)生物素 基甲素(Y8-2)64mg，14-(4-氨基-3-氟苯甲酸)生物素基甲素(Y8-1)96mg。产率分别为 9.2%和13.8%。
参考文献：
[1]李显伦.蓝萼甲素生物素标记物合成[D].苏州大学,2016.
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