替沃扎尼是一种口服生物可利用的血管内皮生长因子受体（VEGFRs）1,2和3抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让我们详细说明。
首先我们介绍替沃扎尼的生物活性：
1）体外活性
替沃扎尼能有效抑制内皮细胞中VEGF诱导的VEGFR2磷酸化（IC50=0.16nM）。它还能抑制配体诱导的PDGFRβ和c-Kit的磷酸化（分别为IC50=1.72和1.63nM），阻断VEGF依赖性，但不依赖于VEGF，激活丝裂原活化蛋白激酶和内皮细胞增殖。此外，它还能抑制VEGF介导的人脐静脉内皮细胞迁移。
2）体内活性
在动物实验中，替沃扎尼能降低肿瘤异种移植物内的微血管密度并减弱肿瘤内皮中的VEGFR-2磷酸化水平。它还显示出对多种人类肿瘤异种移植物的抗肿瘤活性，包括肺癌，乳腺癌，结肠癌，卵巢癌，胰腺癌和前列腺癌。
我们已经了解了替沃扎尼的生物活性，接下来如何进行活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
通过在无胸腺大鼠体内进行实验，可以观察替沃扎尼对肿瘤的影响。具体操作是将癌细胞皮下接种到无胸腺大鼠的右侧，然后口服施用替沃扎尼，并通过测量肿瘤体积来评估其抑制效果。
2）细胞实验
通过在细胞培养基中进行实验，可以确定替沃扎尼对受体酪氨酸激酶的配体依赖性磷酸化的能力。具体操作是将细胞在含有0.5％胎牛血清（FBS）的适当碱性培养基中饥饿过夜，然后加入替沃扎尼或DMSO，并进行配体刺激。最后通过免疫印迹等方法来评估受体磷酸化的程度。
3）激酶实验
通过无细胞激酶测定，可以确定替沃扎尼对多种重组受体和非受体酪氨酸激酶的IC50值。具体操作是使用1μMATP进行实验，并通过测定酪氨酸激酶的活性来评估替沃扎尼的抑制效果。
综上所述，替沃扎尼是一种有效、选择性的VEGFR1/2/3抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。它的靶点活性包括EphB2、PDGFRα、VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3。
参考文献：
Nakamura K, et al. KRN951, a highly potent inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor tyrosine kinases, has antitumor activities and affects functional vascular properties. Cancer Res. 2006 Sep 15;66(18):9134-42.
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