本文将讲述如何对3-氨基-4-氯苯甲酸进行含量分析，旨在为相关领域的研究人员提供实验思路和参考依据。
背景：3-氨基-4-氯苯甲酸是一种重要的有机中间体，广泛用于合成胶片黄成色剂、感光材料中间体（如十二烷脂、十六烷脂等）以及电子化学品。该化合物在染料及医药生产中扮演着重要角色。通常情况下，其合成方法是通过对氯苯甲酸的硝化得到3-硝基-4-氯苯甲酸，再将3-硝基-4-氯苯甲酸还原得到3-氨基-4-氯苯甲酸。目前有关3-氨基-4-氯苯甲酸含量分析的报道较少，而与此相关的HPLC法对苯甲酸衍生物的分离分析，仅局限于硝基苯甲酸与氨基苯甲酸的分离分析。
含量分析：
张志兰等人建立用HPLC法测定 3-氨基 - 4 -氯苯甲酸的含量 ,采用KromasilC18柱 ,以甲醇 - 0.0 5 % (φ)磷酸水溶液 (体积比 6 5 :35 )为流动相 ,流速 1.2mL·min-1,线性范围 0.0 8～ 0.4 0× 10 -4g·L-1,相关系数r=0.9999,加标回收率为 10 1% ,RSD为 0.98% (n =6 )。该法操作简便、准确。实验方法如下：
（1）色谱条件
色谱柱:Kromasil C18(250mm×4.6mm,10μm);流动相:甲醇-0.05%(φ)磷酸水溶液(体积比65:35);流速:1.2mL/min;柱温:40℃;紫外检测波长:254nm。
（2）对照品溶液的制备
精密称取3-氨基-4-氯苯甲酸对照品40mg,置于10mL的容量瓶中,甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀。精密吸取此溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1. 0 mL分别置于10mL容量瓶中,加甲醇稀释定容。浓度为0.08、0.16、0.24、0.32、0.40 g·L-1对照品溶液。
（3）供试品溶液的制备
精密称取3-氨基-4-氯苯甲酸样品40mg,置于10mL的容量瓶中,甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀。精密吸取此溶液0.6mL置于10mL容量瓶中,加甲醇稀释定容。
为了实现对产品的快速准确测定，该方法对色谱柱、流动相和波长等条件进行了精心选择。考虑到该产品及其原料在甲醇中的良好溶解性，采用了反相色谱，并选择了常用的C18柱和甲醇与水作为流动相。由于该产品及原料中含有羧基，具有一定的酸性，为改善色谱峰形，实验中在水中加入了一定量的磷酸。在实验过程中发现，流动相中甲醇的比例过高会导致物质的保留时间过短，各物质之间无法完全分离。随着甲醇含量的降低，保留时间逐渐增长，各物质之间的分离也逐渐完善。当甲醇占65%时，主峰、原料和中间体之间达到了完全分离。在检测波长的选择上，采用了常用的254nm，考虑到主峰及可能存在的有机杂质中均含有苯环结构，故选择了这一波长进行检测。
参考文献：
[1]周丹. 感光黄成色剂中间体3-氨基-4-氯苯甲酸十六酯的合成研究[D]. 河北工业大学, 2019. DOI:10.27105/d.cnki.ghbgu.2019.000684
[2]高纯度3-氨基-4-氯苯甲酸产品新技术. 浙江省, 浙江工业大学, 2009-01-01.
[3]张志兰,丁元晨,项苏留等. HPLC法测定3-氨基-4-氯苯甲酸的含量 [J]. 化学工程师, 2004, (04): 28-29. DOI:10.16247/j.cnki.23-1171/tq.2004.04.014
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