本文将探讨5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷在相关领域上的具体应用，展示其在推动相关领域进步和解决实际问题上的潜力。
简述：5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷（X-gal），英文名称：5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside，CAS：7240-90-6，分子式：C14H15BrClNO6，外观与性状：白色粉末，，折射率：1.731。5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷广泛应用于分子生物学中检测β-半乳糖苷酶，也被用于检测组织化学和细菌学中多种酶的活性。5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷可以透过许多吲哚酚糖苷和酯，经由酶催化水解产生类似于靛蓝色且不溶的蓝色化合物。
应用：
1. 驼乳中产转糖基活性β-半乳糖苷酶乳酸菌的筛选
通过分离筛选高产转糖基活性β-半乳糖苷酶的乳源微生物，为高效合成低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides，GOS)提供新酶源。韩明明等人以添加5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal)的乳糖为碳源的乳酸细菌培养基(MRS)进行初级分离筛选，以产酶菌株粗酶液催化乳糖转糖基反应产物的薄层层析进行复筛，单因素优化最佳产酶条件和转糖基反应条件，硫酸铵分级沉淀纯化β-半乳糖苷酶并对其酶学特性进行初步分析。筛选获得产转糖基活性β-半乳糖苷酶乳酸菌20株，选择产酶水平较高、转糖基活性最强的产β-半乳糖苷酶菌株L6进行进一步研究。
2. 传统奶酪中产转糖基活性β-半乳糖苷酶乳酸菌的筛选
分离筛选产转糖基活性β-半乳糖苷酶的乳酸菌新菌株，为酶法高效合成低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides，GOS)提供新的酶源。王丽军等人以乳糖为唯一碳源，碳酸钙溶钙圈和添加5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(X-Gal)的MRS培养基筛选平板进行初筛，以产酶菌株粗酶液催化乳糖反应产物的薄层色谱(thin layer chromatography，TLC)分析复筛，从新疆伊犁地区牧民手工制作的奶酪样品中筛选产转糖基活性β-半乳糖苷酶的乳酸菌。
3. 高糖环境诱导视网膜细胞衰老的实验研究
细胞衰老在血管功能失调性疾病中的作用越来越受到人们的重视，人们推测细胞衰老可能参与糖尿病相关血管并发症的发生及发展，而目前检测细胞衰老的主要标志是β-半乳糖苷酶表达的上调。刘荣为证实高糖环境对牛视网膜血管内皮细胞(BRVECs)及糖尿病小鼠视网膜衰老状态的影响，对BRVECs进行体外培养和传代，取第7代细胞用于实验。将培养的细胞分为对照组和高糖培养组，分别用含5.5 mmol/L或25.O mmol/L葡萄糖的M199内皮细胞培养液培养细胞7d，用5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷(X-Gal)染色法观察各组离体细胞中β-半乳糖苷酶的阳性表达情况，计算方法为β-半乳糖苷酶阳性细胞/总细胞×100％.将SPF级8～10周龄C57BL/6J雄性小鼠12只，采用随机数字表法分为对照组和模型组，用链脲佐菌素腹腔内注射法制备糖尿病小鼠模型，3个月后取其双眼视网膜平铺于48孔板，采用X-Gal染色法进行染色，光学显微镜下比较两个组小鼠视网膜细胞中β-半乳糖苷酶阳性表达细胞数。
4. 在双歧杆菌分离与活菌计数方面的应用
孙雪等人利用大多数双歧杆菌具有半乳糖苷酶且活性较高的特性，在NPNL培养基中加入X-Gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)作为底物，双歧杆菌水解底物释放出吲哚，产生颜色反应。双歧杆菌菌落呈深蓝色，乳酸菌和其它细菌一般为白色或淡蓝色。将X-Gal应用于不同样品中双歧杆菌分离和活菌计数进行对比。这种方法能比较准确的反映双歧制品和婴儿粪便中双歧杆菌的数量，并且大大减少了分离鉴别双歧杆菌的工作量。结果表明添加了X-Gal的NPNL培养基，用于粪便和双歧乳制品中双歧杆菌的分离计数结果是较为准确的。
参考文献：
[1] 韩明明，褚宇欣，关波，等. 驼乳中产转糖基活性β-半乳糖苷酶乳酸菌的筛选鉴定及其酶学特性分析[J]. 食品科学，2021，42(24):74-83. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20201013-103.
[2] 王丽军，牟元珍，关波，等. 传统奶酪中产转糖基活性β-半乳糖苷酶乳酸菌的筛选鉴定及其合成低聚半乳糖条件[J]. 食品科学，2019，40(22):88-95. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20181120-232.
[3] 刘荣，李斌，胡维琨，等. 高糖环境诱导视网膜细胞衰老的实验研究[J]. 中华实验眼科杂志，2014，32(11):970-974. DOI:10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2014.11.003.
[4] 孙雪，陈树兴，朱文学，等. X-Gal在双歧杆菌分离与活菌计数方面的应用研究[J]. 现代食品科技，2005，21(2):64-65，49. DOI:10.3969/j.issn.1673-9078.2005.02.022.
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