叶绿素A是浮游植物中的重要色素之一，用于估算初级生产力和生物量，也是赤潮监测的必测项目。本文将介绍制备高纯度叶绿素A的具体步骤。
制备高纯度叶绿素A的步骤如下：
1. 取生长至对数生长期后期的钝顶螺旋藻藻液1L，离心分离藻体，弃去上清液，沉淀富集在1个离心管中，然后用50mL乙醇萃取三次，萃取液合并。
2. 萃取液中加入适量石油醚(60～90℃)，加水至分相，含色素的石油醚相用水洗涤两次。
3. 在层析柱中填充100-200目中性氧化铝，先用含0.3％乙醇的石油醚溶液润湿氧化铝柱，然后上样，再采用0.3％、10％的乙醇－石油醚混合溶剂梯度冲洗。先冲出的是橙黄色的类胡萝卜素，后冲出的是蓝绿色的叶绿素。旋蒸回收溶剂，获得墨绿色的叶绿素A沉淀。
本文介绍了两种测定叶绿素A含量的方法。
方法一：
1. 取50～200ml水样，采用0.45μm醋酸纤维滤膜进行过滤，真空泵压力控制在0.05MPa，获得截留有藻细胞的滤膜。
2. 将截留有藻细胞的滤膜剪碎放入装有6ml体积浓度为90％的乙醇溶液的离心管中，置于4℃冷藏12～24h。
3. 离心管于8000r/min离心15min，收集上清液，再向离心管中补加4ml体积浓度为90％的乙醇溶液，再于8000r/min离心5min，收集上清液，合并两次离心获得的上清液，并加入质量浓度为90％的乙醇溶液定容至10ml，得萃取液。
4. 将萃取液于8000r/min离心5min，得萃取液上清液，以质量浓度为90％的乙醇溶液做参比，用分光光度计测定萃取液上清液在630nm、647nm、664nm和750nm波长下的吸光度值，按公式计算水体中叶绿素A的含量。
方法二：
本方法适用于检测枣树冠层叶绿素A含量。
1. 选择晴朗、无云或少量云层、风力小于3级的天气采集所需测定叶绿素A含量枣树冠层的高光谱信息。
2. 对高光谱数据进行多元散射校正后，采用小波降噪，再进行平滑处理。
3. 提取待测定叶绿素A含量枣树冠层的483、554、600、760、954、1153、1340、1406nm波长的光谱反射率值。
4. 将各波长的反射率值代入枣树冠层叶绿素A含量检测模型进行计算。
[1] 水利大辞典
[2] [中国发明] CN201510528132.6 一种从钝顶螺旋藻制备高纯度叶绿素A的方法
[3] [中国发明] CN201210046341.3 一种测定水中叶绿素A的方法
[4] [中国发明] CN201610361871.5 一种枣树冠层叶绿素A含量的检测方法
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