葡萄糖-6-磷酸酶是糖代谢中的重要酶类,具有催化6-磷酸葡萄糖及氨基-6-磷酸葡萄糖分解的功能。该酶在人体内主要分布于小肠、肝、肾组织细胞内质网的脂质中。正常情况下,血清中的葡萄糖-6-磷酸酶活性较弱,但在某些疾病中,如Ⅰ型糖原累积病,肝内葡萄糖-6-磷酸酶活性会降低或完全消失。而在肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝癌等疾病中,血清葡萄糖-6-磷酸酶活性会增高。因此,葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)被广泛应用于相关疾病的实验诊断中。
1、将冰冻切片放入蒸馏水中清洗。
2、将切片放入葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)的孵育液中,在37℃下孵育。
3、用自来水冲洗切片,然后用蒸馏水冲洗。
4、在上述过程中,配制ALP硫化工作液。将试剂(B)用蒸馏水稀释50倍,得到ALP硫化工作液。将切片放入硫化工作液中孵育。
5、用自来水进行水洗。
6、可选择将切片放入中性福尔马林中进行固定。
7、用蒸馏水进行2次水洗。
8、使用甘油明胶封片。
9、染色结果:葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)会在酶活性处形成棕色沉淀。
1、ALP硫化液易失效,最好分成小份储存,开启后应立即使用。
2、ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味,操作时需小心。
3、在冰冻切片染色时,应尽量减少切片在室温下的暴露时间。
4、葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)适用于冰冻切片,一般不需要进行固定,但也可以在染色后进行固定,这一步骤并非必须。
[1] 临床肝病实验诊断学
[2] 葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)操作说明