微量蛋白沉淀试剂盒是一种用于微量沉淀浓缩蛋白质样品的试剂盒。它通过酸使蛋白质变性，溶解度降低，在离心条件下沉淀，从而实现蛋白变性、蛋白浓缩和蛋白去盐的目的。此外，它还可以去除污染的盐离子和其他小分子。
微量蛋白沉淀试剂盒是一种方便迅速的操作方法，只需要混匀后离心，无需其他仪器。它具有稳定的特点，可以在室温下长期放置。此外，它适用于处理各种液体样品，包括细胞或细菌培养物、细胞裂解物和蛋白质提取物等。它的浓缩效果强，可以浓缩浓度低达1μg/mL的蛋白。对于含有SDS的样品，它也可以使用，但灵敏度稍低(5μg/mL)。通过使用微量蛋白沉淀试剂盒，可以得到的蛋白质可用于后续的SDS-PAGE、免疫沉淀和质谱分析等实验，但需要注意的是蛋白已经变性，没有活性。
使用方法：用于不含SDS的样品，但样品蛋白浓度不能低于1μg/mL
1、将100μL需要沉淀浓缩的蛋白样品转移到一个自备的1.5mL塑料离心管中。
2、加入10μL溶液A，涡旋激烈震荡10-30秒混匀。
3、冰上放置15分钟。
4、加入10μL溶液B，轻轻混匀。
5、冰上放置60分钟。
6、4℃12000～15000×g离心10分钟。
7、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
8、加入1mL冰浴的溶液C，震荡混匀后4℃12000～15000×g离心15分钟。
9、小心移弃上清液，保留蛋白沉淀。
10、短暂离心，小心移弃残留上清液后，将有蛋白沉淀的离心管敞开放置在冰上，空气晾干。一般需要10分钟左右。
11、样品放4℃保存或立即电泳检测。可直接用1×SDS-PAGE上样液或其他电泳缓冲液溶解蛋白沉淀，取适量上样。如果蓝色的溴酚蓝染料变黄，则说明有残留酸性物质TCA污染，必须加少量自备的1M Tris-HCl(pH8.8)缓冲液，直到颜色变成蓝色为止，否则将影响电泳结果。
棉籽浓缩蛋白的制备在双液相棉粕中，棉壳约占30%。为了制备棉籽浓缩蛋白，本研究利用棉壳和棉仁密度上的差异，通过比较选定了K2CO3溶液作为液选剂制得棉籽浓缩蛋白，并考察了浓度和预处理方式对分离效果的影响。
棉籽蛋白的功能特性分析了棉籽浓缩蛋白、沉淀蛋白、溶解蛋白三种蛋白产品中的蛋白质含量、植酸含量，并考察了三种蛋白产品的功能特性，包括溶解性、吸水性、吸油性、乳化性与乳化稳定性、起泡性与泡沫稳定性等。结果显示，棉籽浓缩蛋白、沉淀蛋白、溶解蛋白的蛋白质含量依次为74.8%、93.6%和83.3%，植酸含量依次为2.69%、1.66%和2.18%。棉籽溶解蛋白的氮溶指数低于菜籽溶解蛋白（91.42%）。当pH偏离7.0时，棉籽沉淀蛋白的NSI急剧增加，pH=10.5时，NSI=90%。棉籽沉淀蛋白和浓缩蛋白的吸水性和吸油性均随温度的升高而增大。在吸水性方面，与菜籽沉淀蛋白相比，棉籽蛋白产品的吸水性要低，但高于大豆沉淀蛋白。在吸油性方面，棉籽蛋白均低于菜籽蛋白和大豆蛋白。
[1]Suitability of commercial cottonseed for producing edible high protein flours by liquid classification[J].R.J.Hron,S.P.Koltun,A.V.Graci.Journal of the American Oil Chemists’Society.1982(5)
[2]Food uses for cottonseed protein[J].James J.Spadaro,Homer K.Gardner.Journal of the American Oil Chemists’Society.1979(3)
[3]Cottonseed protein food products[J].C.M.Cater,K.F.Mattil,W.W.Meinke,M.V.Taranto,J.T.Lawhon,B.B.Alford.Journal of the American Oil Chemists’Society.1977(2)
[4]Aqueous solvents for extracting glanded cottonseed protein without gland rupture[J].L.L.Muller,T.J.Jacks,T.P.Hensarling.Journal of the American Oil Chemists’Society.1976(9)
[5]崔志芹.从双液相棉粕中制备浓缩蛋白和分离蛋白[D].南京工业大学,2004.
1
