如何利用抗体检测β淀粉样前体蛋白裂解酶2的体外实验? ¹

β淀粉样前体蛋白裂解酶2抗体是一种多克隆抗体，可以特异性结合β淀粉样前体蛋白裂解酶2，主要用于体外检测实验。

β淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein，APP）是一种存在于全身组织细胞上的单次跨膜蛋白。经蛋白酶裂解后，会产生具有毒性作用的β淀粉样蛋白。目前对APP的生理功能了解甚少。

β淀粉样前体蛋白裂解酶2免疫组化图

β淀粉样前体蛋白（APP）经β淀粉样前体蛋白裂解酶（β-siteAPP cleaving enzyme，BACE1）和γ-分泌酶裂解产生β淀粉样蛋白。老年斑的核心成分β淀粉样肽（β-amyloid peptide，Aβ）被认为是阿尔茨海默病（AD）发生的主要原因。

如何利用siRNA干扰技术研究减少神经细胞β淀粉样蛋白的产生？

研究目的

利用干扰技术应用siRNA对BACE1基因进行干扰抑制，观察BACE1基因在SK-N-SH细胞株中的表达改变以及Aβ产生的变化。

实验方法：

1. 利用化学合成的siRNA干扰或封闭BACE1基因，观察BACE1的表达改变。
2. 观察BACE1基因表达下降后，对体外培养的神经细胞Aβ产生的影响。
3. 使用人类神经母细胞瘤细胞SK-N-SH作为体外研究的细胞系。
4. 设计合成特异性针对BACE1基因的siRNA。
5. 利用转染试剂将siRNA转染入SK-N-SH细胞。
6. 使用RT-PCR检测BACE1基因的表达。
7. 使用Western blot方法检测转染后神经细胞的BACE1蛋白表达。
8. 使用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞外分泌的Aβ42的量。

参考文献

[1] Juan Manuel Maler, Hans W. Klafki, Hermann Esselmann, Nikolaus Kunz, Sabine Paul, Johannes Kornhuber, Jens Wiltfang. Alzheimer's & Dementia: The Journal of the Alzheimer's Association. 2006(3)

[2] Rudolph E. Tanzi, Lars Bertram. Cell. 2005(4)

[3] P. Hemachandra Reddy, M. Flint Beal. Brain Research Reviews. 2005(3)

[4] Makoto Hashimoto, Edward Rockenstein, Leslie Crews, Eliezer Masliah. NeuroMolecular Medicine. 2003(1)

[5] 高素琴. 干预β淀粉样前体蛋白裂解酶基因减少神经细胞β淀粉样蛋白的产生[D]. 山东大学, 2009.