最近在做硅胶柱分，遇到些麻烦，有一样品,预计有A B C D四成分，TLC条件：石油醚：乙酸乙酯 9：1。
结果如下：成分A Rf 0.5，成分B Rf 0.4，成分C Rf 0.25，成分D Rf 0.2
我想拿到A 和B。样品拌了硅胶大概0.5g 上2cm的柱子，硅胶大概装了10cm，洗脱剂按常规极性减半，18：1冲柱，50ml加一个梯度，大概25ml收一瓶，后来点板发现还是没有分开，各位前辈指教：
1、还是弄不明白，怎样根据TLC条件确定柱分洗脱剂的比例，
2、柱体积的计算，是不是还要考虑硅胶的溶胀？例如，我的柱子直径2cm，装了10cm硅胶，石油醚乙酸乙酯体系里面，柱体积应该怎么算呢？
3、一个极性梯度需要加多少洗脱剂？是不是一直要冲到TLC显示没有东西出来？
