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无机焦磷酸酶的应用和特性? 1

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概述[1]

无机焦磷酸酶(PPA)基因是植物糖代谢过程中的蔗糖合成调控基因,为将该基因运用于甘蔗转基因的研究,从面包酵母克隆了该基因。无机焦磷酸酶(酵母)纯化自重组 E. coli 菌株,携带有从酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)克隆的 ppa 基因和蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 内含肽的融合基因。该焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐:P207-4 + H20 →2HP04-2。在核酸扩增实验中,其可解除生成的无机焦磷酸盐对反应体系的抑制。由 Biohelix 公司(现在是 Quidel 公司的全资子公司)研发。无机焦磷酸酶(英语:Inorganic Pyrophosphatase,简称为焦磷酸酶)是一种催化一分子焦磷酸盐转化为两分子磷酸盐离子的酶。这是一个高放能的反应,因此此反应可偶联到一些热力学上不利的转化,以便驱动这些转化进行到完全。此酶的功能乃是在脂代谢(包括脂合成与分解)、钙吸收以及骨形成和DNA合成中扮演重要角色,其他生物化学转化也是如此。

组分

组分名称

数量

Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)

100 μl/1 ml

应用

无机焦磷酸酶可用于反转录反应中提高 RNA 产量,以及增强 DNA 复制。

活性定义

活性定义为在标准反应条件下(20mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM MgCl2,2mM PPi,25℃ 反应 10 分钟),每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐所需的酶量。

储存

该酶可在-20℃保存3年。

使用注意事项

1. 该酶在多种反应Buffer中均具有活性,通常可直接接入HDA扩增、LAMP扩增等实验中。

2. 该酶的用量在不同的实验中需要优化,通常在0.05~1U/ml浓度调整。

3. 该酶的最佳反应温度为25℃,其在16~37℃均有活性,但65℃ 10min可使该酶失活。

主要参考文献

[1] 范海阔, 黄东杰, 刘巧泉, 等. 无机焦磷酸化酶融合基因克隆分析及表达载体的构建[J]. 西南農業學報, 2007, 20(6): 1267-1271.

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