三糖铁琼脂是一种常用的分离纯化及鉴别培养基，其有效期约1~2周。然而，由于水分蒸发干裂，导致其失效。对于基层医院来说，细菌培养标本量较少，因此如果准备过多，会造成浪费；而准备量少则会导致称量误差大，成本较高。为了解决这个问题，我们提出了一种新的三糖铁琼脂培养基的制备方法。
我们的三糖铁琼脂培养基与其他同类培养基相比具有独特的特点。我们将培养基分为上下两层。上层配方包括蛋白胨、氯化钠、琼脂(固体)、乳糖、葡萄糖、硫酸亚铁、硫代硫酸钠、酚红、尿素和玫瑰红酸；下层配方包括蛋白胨、氯化钠、琼脂(半固体)、甘露醇和中国蓝。这种培养基不仅可以观察细菌是否产生硫化氢以及对糖的发酵能力，还可以观察细菌是否具有动力以及分解尿素和甘露醇的情况。具体的配方如下：
上层：蛋白胨5.0-8.0g、氯化钠2.3-2.5g、琼脂5.0-6.0g(固体)、乳糖5.0-6.0g、葡萄糖0.05-0.1g、硫酸亚铁0.1-0.2g、硫代硫酸钠0.1-0.15g、尿素8.0-10.0g、0.4％酚红2.5-3.0ml、1％玫瑰红酸2.3-2.6ml、蒸馏水500ml。
下层：蛋白胨0.3-0.6g、氯化钠1.3-1.5g、琼脂0.6-1.5g(半固体)、甘露醇0.5-1.0g、1％中国蓝1.5-2.0ml、蒸馏水300ml。
制备方法如下：
上层：a将蛋白胨、氯化钠、琼脂按比例加入蒸馏水中，热熔，调PH7.2；b加入乳糖、葡萄糖、硫酸亚铁、硫代硫酸钠、酚红，压力蒸汽灭菌113℃15分钟；c再加入尿素、玫瑰红酸。
下层：a将蛋白胨、氯化钠、琼脂按比例加入蒸馏水热熔，调PH7.6；b加入甘露醇、中国蓝，分装试管、高压113℃15分钟，冷却后加高压过的上层。
注明：先将称量用具和分液烧瓶高压灭菌。中国蓝为指示剂，其水溶液应隔水煮沸无菌后使用。玫瑰红酸是乙醇溶液，无需灭菌，但加时应避开火焰，以免燃烧。
[1] CN201210025431.4 一种三糖铁琼脂培养基及制备方法
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