本文将介绍从银杏叶分离纯化白果内酯的方法，希望能为白果内酯的研究与应用提供参考思路。
简介：银杏叶提取物是经现代提取工艺从银杏叶中提取的活性物质，其主要活性化学成分主要包括两大类：黄酮类及萜类。银杏内酯 A、B、C等是二萜类内酯，白果内酯属于半萜类内酯，是血小板活化因子(platelet activating factor， PAF)拮抗剂。白果内酯(bilobalide)分子中含有15个碳原子，属于倍半萜类化合物。白果内酯具有保护神经的作用，对老年痴呆的治疗具有良好的效果。
1. 分离纯化
目前，天然植物银杏叶是分离纯化白果内酯的主要原料，其分离纯化方法较多，特介绍几种常见的分离方法。
（1）高速逆流色谱（HSCCC）
HSCCC是一种固定相与流动相均采用液体的液-液色谱，对样品破坏性较小，可用于天然产物中活性成分的分离纯化，然而高成本等因素的制约造成不能够大规模生产。刘晶等通过流动注射技术成功实现高速逆流色谱与蒸发光散射检测器一体化，既可以有效分离，又能够实现ELSD的在线检测，结果表明从500mg 初纯化的银杏内酯中可获得83 mg白果内酯单体，纯度大于98%。苏静等通过 HSCCC技术对纯化后的总内酯进行两次分离，成功获得银杏内酯A、B、C及白果内酯，其中白果内酯的质量分数为98.3%。
（2）大孔吸附树脂法
大孔吸附树脂法主要基于范德华作用力对目标组分进行吸附，因各物质的分子量不同导致分子间的作用力也具有差异性，可选择合适的洗脱剂对不同组分进行洗脱从而分离纯化。何珺等采用DA201型大孔树脂对银杏叶粗提物进行了分离，最后重结晶获得了白果内酯单体，纯度可达95%。
（3）柱层析法
柱层析法即柱色谱技术，柱填料充当固定相，洗脱液作为流动相，因样品中各组分物质在两相中的分配系数具有差异性，因此可用于不同组分的分离。高香兰采用柱层析法和重结晶技术成功从银杏提取物中获得了纯度约为90%的白果内酯。
（4）超临界CO2萃取法
超临界CO2流体作为一种特殊介质，既具备气体的扩散速度，又拥有液体的良好溶解性能。通过对温度与压力的调节实现CO2流体密度的改变，从而控制其溶解性能，可实现天然产物活性成分的萃取和分离。潘见等在萃取工艺的优化基础之上，对银杏叶粗提物进行了提取，内酯类的纯度在85%左右。此法具有易控性，且绿色环保，同时可不破坏提取物的有效成分，但此设备造价高，不利于大规模提取。
（5）配位色谱法
潘见等人了建立白果内酯的配位色谱分离纯化方法。方法:10g 白果内酯初提物经柱前与0.01mol·L-1配位剂-硼砂反应，0.1 mol·L-1盐酸调 pH 到5.0左右，常压硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱。结果:Na2B4O7配位色谱法所得白果内酯的纯度为82.1%和76.9%;回收率为75.5%和72.1%。较普通色谱法纯度提高7.4%-12.6%，回收率提高11.9%-15.3%。
2. 标准样品的研制
付瑞明等建立了银杏叶中白果内酯标准样品的制备方法。以银杏的干燥叶为原料，采用硅胶柱色谱结合凝胶柱色谱富集和制备液相精制的方法，制备白果内酯单体。
制备步骤如下：采用体积分数30%乙醇90 ℃加热回流提取白果内酯，料液比1:5，萃取液减压蒸至无醇味，经石油醚脱脂后，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相经pH 8～9的NaHCO3水溶液(体积比1:1)萃取4次后，乙酸乙酯相减压蒸干得粗提物20.0 g。粗提物经硅胶分离(100～200目，V(二氯甲烷):V(甲醇)=100:0～5:1，梯度洗脱)。V(二氯甲烷):V(甲醇)=30:1组分经过Sephadex LH-20凝胶，甲醇为洗脱剂得白果内酯，纯度90%，经制备型高效液相色谱纯化，流动相V(甲醇):V(水)=52:38，流速10 mL/min， 检测波长220 nm， 得纯度大于99%的白果内酯（见下图）。
参考文献：
[1]付瑞明,胡金春,孟兆青等. 白果内酯标准样品的研制 [J]. 山东科学, 2022, 35 (01): 6-13.
[2]黄徐胜. 分子印迹固相萃取分离纯化白果内酯及抗抑郁作用研究[D]. 合肥工业大学, 2021. DOI:10.27101/d.cnki.ghfgu.2021.001537.
[3]李文东. 银杏叶中银杏内酯的分离纯化及标准样品研制[D]. 山东农业大学, 2017.
[4]潘见,徐涛. 配位色谱法分离纯化白果内酯 [J]. 药物分析杂志, 2005, 25 (06): 614-617.
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