细胞培养过程中常常需要使用HEPES缓冲液来维持pH值。HEPES缓冲液是一种弱碱性物质，可以在开放式培养条件下防止培养基的pH值升高，保持在7.0左右。
HEPES的分子量为238.31，化学名为4-羟乙基哌嗪乙磺酸，化学式为C8H18N2O4S。
HEPES常用于生物缓冲剂，其pH值缓冲范围为6.8-8.2，广泛应用于生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒和PCR诊断试剂盒中。它对细胞没有毒性作用，是一种能够长时间稳定控制pH范围的氢离子缓冲剂。使用时的最终浓度为10-50mmol/L。
关于HEPES缓冲液的配制方法，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是只使用HEPES和NaOH，另一种是使用HEPES和盐。
以下是几种常见的配制方法：
一、配制500ml 1 MHEPES，pH = 7.0的储备溶液
将119.15g HEPES溶解在400ml蒸馏水中，加入0.5~1M的NaOH水溶液调节至所需的pH值（HEPES的有效pH范围为6.8~8.2），然后用蒸馏水定容至500ml，保存在4摄氏度。
二、加入少量盐的HEPES缓冲液配方（500ml）
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g，使用0.5M NaOH水溶液调节pH值，最后定容。
三、配制2×HEPES缓冲盐溶液
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖（glucan or dextran）和1g HEPES溶解在90ml蒸馏水中，使用0.5M NaOH调节至所需的pH值，再用蒸馏水定容至100ml。
HEPES的使用方法有两种：
1. 可以直接将HEPES按所需浓度加入到配制的培养液中，然后进行滤过除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，溶解后使用1NNaOH调节pH至7.2，滤过除菌后即可使用。此时HEPES的使用浓度为10mmol/L。
2. 也可以配制成100x储存液（1 mol/L），使用时取99ml培养液加入1ml储存液，最终浓度仍为10mmol/L。配制100x HEPES储存液的方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，使用1N NaOH调节pH至7.5-8.0，然后用水定容至100ml，进行滤过除菌，分装到小瓶中（每瓶2ml），保存在4℃或-20℃。
需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对细胞没有毒性作用。一般情况下，20mmol/L的HEPES浓度已经足够提供缓冲能力。市售的HEPES通常是以约10g的小瓶包装，根据实际情况进行正确灵活的配制即可。
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