目前，国内外尚未找到一种被广泛认可且方便实用的间充质干细胞培养方法。大多数人仍然使用添加胎牛血清（FBS）的培养基来培养间充质干细胞。然而，这种异种血清可能携带细菌、病毒等有害物质，存在许多安全隐患。异种血清中的异源性蛋白质容易引起人体过敏反应。研究表明，在体外培养过程中，间充质干细胞会吞噬培养基中的蛋白质。因此，含有胎牛血清的培养基会使间充质干细胞中含有牛血清蛋白质，从而引起免疫反应。由于存在这些问题，人们限制了在临床中使用血清等添加物来培养间充质干细胞。
CN201811115805.5披露了一种无血清培养基，用于培养间充质干细胞。该培养基包括基础培养基和添加物，其中添加物包括氨基酸、缓冲剂、白蛋白、其他蛋白质和营养因子。
该培养基具有以下优点：
(1) 无血清培养基不含动物血清或其他异源性蛋白质，减少了细胞制剂被污染的风险。在无血清培养基中添加了特定的营养因子，提高了细胞扩增效率并保持了干细胞的生物特性，增加了间充质干细胞的存活率，确保了细胞的质量达到临床应用标准。
(2) 简化了细胞分离步骤，组织消化后的细胞可以直接用于原代培养，并确保培养细胞的特异性。
(3) 使用无血清培养基培养的间充质干细胞具有良好的贴壁性，呈现出梭形的成纤维细胞形态。经过多代培养后，细胞仍然保持正常状态。细胞生长曲线显示细胞保持高扩增效率。细胞免疫表型分析表明，CD29、CD73、CD90和CD105阳性表达物的比例超过95％，而CD14、CD34、CD45、CD79a和HLA-DR等阴性表达物的比例低于2％，达到了临床应用的水平。
制备无血清培养基来培养间充质干细胞，需要基础培养基和添加物。基础培养基为DMEM，添加物包括氨基酸、缓冲剂、白蛋白、其他蛋白质和营养因子。氨基酸的种类包括L-酪氨酸、L-胱氨酸、甘氨酸、L-缬氨酸、L-色氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-丙氨酰-L-谷氨酰胺和L-甘氨酰-L-谷氨酰胺。
缓冲剂包括L-磷酸甘油二钠盐水合物和4-羟乙基哌嗪乙磺酸。
此外，白蛋白的浓度为2g/L。其他蛋白质包括Holo Transferrin（人全铁转铁蛋白），营养因子包括胆固醇、EGF和bFGF。这些添加物的浓度分别为：Holo Transferrin 5mg/L、胆固醇0.125mg/L、EGF 0.001mg/L和bFGF 0.001mg/L。
根据上述制备的无血清培养基，可以进行间充质干细胞的原代、传代和扩增培养。CN201811115805.5使用脐带来源的间充质干细胞作为技术实施对象材料，按照以下步骤方案进行脐带间充质干细胞的分离、原代培养、传代和扩增培养。通过记录传代培养细胞的细胞形态、生长曲线和流式细胞分析细胞表面抗原，分析使用CN201811115805.5提供的无血清培养基扩增间充质干细胞的效果（结果如图1、图2和图3所示）。
[1] CN201811115805.5 一种间充质干细胞无血清培养基
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