无动物源性胰蛋白酶/EDTA的使用方法？ ¹

无动物源性胰蛋白酶/EDTA是一种重组酶，可用于消化贴壁细胞，替代动物胰腺来源的消化酶。与天然胰蛋白酶制剂相比，本产品具有更高的特异性，适用于无血清培养体系中的贴壁细胞消化。本产品溶剂为PBS/1mM EDTA，为即用型产品，不含酚红。

使用步骤

1. 将无动物源性胰蛋白酶/EDTA和完全培养基在37℃复温。

2. 丢弃待消化的培养瓶中的培养基上清。

3. 用5 ml无钙镁离子的PBS清洗细胞层，并丢弃洗液。

4. 在培养瓶中加入适量的无动物源性胰蛋白酶/EDTA（例如：75cm2培养瓶中加入5ml消化液），确保贴壁细胞层完全被消化液浸没。

5. 在37℃下孵育，直至细胞被完全消化（使用倒置显微镜观察，确保细胞完全被消化）。可以轻拍瓶底，帮助细胞解离。

6. 在培养瓶中加入5-10ml的完全培养基，倾斜培养瓶以各个角度冲洗，然后将液体转入15ml离心管。

7. 以100g离心5-10分钟。

8. 去除上清后，用2-5ml复温的完全培养基重悬。

9. 确定细胞浓度和活力。

10. 根据细胞特性以一定的浓度接种细胞，即可进行培养。