今天跑western的时候，看到溴酚蓝快跑出胶了就停止电泳，但是把胶拿出来一看就发现溴酚蓝上方就直接是40KD的marker，十几二十几的marker全都没有。
我做的流程如下：
按说明书制胶，8.5%的分离胶。
上样量为50ug蛋白，3ul marker（thermo，170KD），两端补齐1Xloading buffer。
90V跑30min，过浓缩胶与分离胶界限后改为120v 30min，由于时间比较紧，后又改为140V 40min，160v跑完。加大电压后将整个电泳槽都置于冰水中。这个方法我以前也用过，跑出来的没什么问题。所以今天突然这样子了，很不解是为什么，而且这样一来我的GAPDH内参也没了……
