背景及概述
目前已发现C反应蛋白（CRP）是一种重要的急性时相反应蛋白之一。作为灵敏的炎症指标和心血管疾病发病诊断及风险预测指标，CRP在许多疾病的筛查、监测和疗效评估中具有重要价值。然而，目前市场上的CRP及其检测试剂多依赖进口，价格昂贵，限制了其临床研究和应用。传统获得人CRP的方法主要是从患者血清或腹水中直接分离纯化得到，但由于材料来源困难、纯化难度大和产量低，这种方法存在一定的局限性。随着生命科学的发展，利用基因重组技术生产医用蛋白成为当前生物和医学研究的热点。已有研究报道利用基因工程的方法获得重组人CRP，但存在一定的问题。因此，有研究旨在探索利用真核甲醇酵母表达系统分泌表达并制备具有免疫反应性的重组人C反应蛋白（CRP），为进一步的rhCRP基础研究和CRP检测试剂的自主研制提供重要的实验材料和实验基础。
近年来，重组人C反应蛋白（CRP）的促炎症和致动脉粥样硬化的作用已经得到广泛研究和证实。重组人CRP可以诱导单核细胞趋化因子、细胞黏附分子和纤溶酶原激活抑制物1的产生，降低内皮细胞一氧化氮的表达和生物活性，减少前列腺素的合成，并增加内皮素1、白介素6和白介素8的释放，从而导致内皮细胞的功能障碍和活化。
研究表明，重组人CRP通过Fcγ受体Ⅱ和细胞外信号调控激酶(ERK)途径刺激U937细胞基质金属蛋白酶1 (MMP-1) mRNA的表达和蛋白质的合成，促进斑块破裂。最近的研究发现CRP通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径刺激内皮细胞表达MMP-1和MMP-10。此外，研究还发现CRP与脐静脉内皮细胞共同孵育时，随着内皮细胞表达CD40及配体CD40L的增多，细胞培养上清液中明胶酶A即MMP-2的活性也有明显增高的趋势，这表明CRP通过CD40-CD40L信号途径介导内皮细胞表达明胶酶活性的增加。
实验观察了CRP对HUVEC表达MMP-2的影响，结果发现CRP呈时间和浓度依赖性上调HUVEC的MMP-2表达。正常人血清中的CRP水平低于0.2mg/L，而不稳定型心绞痛患者的血清CRP水平一般大于3mg/L。研究还发现AS斑块内的CRP浓度可能远高于血浆中测定水平的近10倍，因此局部AS损伤处CRP水平足以刺激内皮细胞分泌更多的MMPS。
实验中使用了5mg/L到50mg/L的4个浓度点，这与冠心病患者体内的血清CRP水平相符。同时，还观察了同一浓度CRP对内皮细胞MMP-2表达的时间效应，结果显示脐静脉内皮细胞表达MMP-2随浓度和时间的增加而增加。有些研究认为体外实验中CRP诱导内皮细胞的炎症改变归因于CRP不纯，即制品中叠氮钠的作用。实验中加入了叠氮钠组对照，结果显示0.0025%叠氮钠（50mg/LCRP中叠氮钠含量）对MMP-2蛋白和基因的表达几乎没有影响，证明实验中CRP对脐静脉内皮细胞的作用并非叠氮钠所致。
[1] 重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定
[2] 重组C反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2
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