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大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒如何应用双抗体夹心法测定标本中的CA水平? 1

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大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒利用双抗体夹心法来测定标本中的大鼠儿茶酚胺(CA)水平。首先,将纯化的大鼠儿茶酚胺(CA)抗体包被在微孔板上,形成固相抗体。然后,在包被抗体的微孔中加入儿茶酚胺(CA),与HRP标记的儿茶酚胺(CA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过充分洗涤后,加入底物TMB进行显色。在HRP酶的催化下,TMB转化为蓝色,然后在酸的作用下转化为最终的黄色。颜色的深浅与样品中的儿茶酚胺(CA)水平呈正相关。最后,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中的大鼠儿茶酚胺(CA)含量。

如何处理和要求大鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒的样本?

1. 血清:室温下自然凝固10-20分钟,然后离心20分钟(2000-3000转/分)。仔细收集上清液,如果出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:根据标本要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟(2000-3000转/分)。仔细收集上清液,如果有沉淀形成,应再次离心。

3. 尿液:使用无菌管收集,离心20分钟(2000-3000转/分)。仔细收集上清液,如果有沉淀形成,应再次离心。胸腹水和脑脊液的处理方法类似。

4. 细胞培养上清:检测分泌性成分时,使用无菌管收集。离心20分钟(2000-3000转/分)。仔细收集上清液。检测细胞内成分时,使用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融破坏细胞并释放细胞内成分,然后离心20分钟(2000-3000转/分)。仔细收集上清液。如果有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS(PH7.4),并迅速冷冻保存在液氮中。融化后仍保持2-8℃的温度。使用手工或匀浆器将标本充分匀浆。离心20分钟(2000-3000转/分)。仔细收集上清液。一部分用于检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后应尽早进行提取,按照相关文献的方法进行提取。如果无法立即进行实验,可将标本放在-20℃保存,但应避免反复冻融。

7. 不能检测含有NaN3的样品,因为NaN3会抑制辣根过氧化物酶(HRP)的活性。

主要参考文献

[1] 张振服;刘启德;杨蕾;宓穗卿;王宁生。高血压肝阳上亢证大鼠模型的血压节律特征及机理研究。中药新药与临床药理。

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