钴胺素转运蛋白受体CD320是低密度脂蛋白受体家族的成员，对钴胺素转运起重要作用，并参与多种生理过程的调节。本研究通过RT-PCR技术克隆了山羊CD320基因，并进行了生物信息学分析。同时，采用qRT-PCR技术分析了CD320在成年山羊不同组织以及睾丸发育各时期的表达谱。结果显示，CD320基因成功克隆，编码的蛋白具有高度保守的结构域。CD320在山羊各个组织中均有表达，其中在肺、睾丸和肌肉组织中的表达水平显著高于其他组织。在睾丸中，CD320的表达量随着发育成熟而增加，性成熟期时表达量最高。此外，CD320分子的重组蛋白实验步骤包括设计简并序列、引物合成、PCR扩展、双酶切、插入载体、转化、诱导表达、SDS-PAGE检测和测序。
CD320分子(CD320)重组蛋白实验步骤
1.设计CD320分子(CD320)重组蛋白的N端10-15个氨基酸的简并序列。
2.合成上述简并序列的引物，并设计合成目的基因反向引物。
3.进行PCR扩展，将兼并序列引入目的基因的5'端，同时保持氨基酸序列不变。
4.进行双酶切，并将目的基因插入到目标载体中。
5.进行转化。
6.将多个克隆挑选到1.5ml EP管中，直接诱导表达（同时带上改造克隆菌株的对照）。
7.进行SDS-PAGE检测。
8.挑选高表达的多个克隆进行测序。
主要参考资料
山羊钴胺素转运蛋白受体基因CD320的克隆与表达模式
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