银杏内酯B是一种具有潜在药用价值的化合物，在银杏提取物中的纯化方法成为了研究者们关注的焦点之一。
简介：银杏内酯B是在银杏内酯中银杏内酯B(BN52021)的活性生理活性最强，是迄今发现的最强的血小板活化因子拮抗剂，可在临床上用于治疗血栓、急性胰腺炎和心血管疾病，还可用于转移性癌症的治疗，对损伤神经元也有保护作用，同时具有抗氧化，延缓衰老的作用。银杏内酯b注射液成分单一明确，疗效显著，安全性好，市场接受度高，为不可多得的新型中药静脉注射剂型。银杏内酯b注射液功能主治化痰祛瘀，通脉舒络。用于治疗缺血性脑中风的痰瘀阻络证。但其也有一定的毒性，最近几年，随着对银杏内酯B药理作用研究的不断深入，通过研究银杏内酯B对成熟小鼠卵母细胞、受精和胚胎发育顺序的影响，发现银杏内酯B能刺激和抑制凋亡信号，诱导小鼠囊胚发育，并增加早期囊胚死亡，影响胚胎发育。
银杏内酯B的纯化：银杏内酯B由于在银杏浸膏粉中只含1%～2%,且与银杏内酯A、C等结构相近,因此分离极为困难。银杏内酯B的分离属于精细分离，市场需求一定的数量,因此必须有规模化的精细分离技术与之适应。银杏内酯单体的纯化方法主要是在提取到银杏提取物的基础上进行分离纯化，主要方法为柱层析技术和溶剂结晶方法。
1. 溶剂结晶法
溶剂结晶法是将主溶剂与次溶剂(即反溶剂)结合使用，从而降低待结晶物在溶剂中的溶解性。被溶解的盐是在转变温度附近与反溶剂混合的。由于反溶剂与水结合，降低了盐的溶解性，从而使盐析出形成固相。然后从液相中过滤出固体，再分离两种溶剂。陈凡等人，原料经过乙酸乙酯萃取，蒸发干燥后的萃取物使用乙醇溶解，使用正己烷-乙醇体系溶剂结晶，最后经热乙醇重结晶，得到纯度95%以上的银杏内酯 混合结晶。高丽娟等使用模拟移动床色谱获得纯度较高的银杏内酯混合物，之后，使用乙醇-水体系溶剂结晶法和甲醇-水体系溶剂结晶法获得纯度大于90%的银杏内酯单体B。
2. 柱层析技术
柱层析的主要原理是根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，经多次反复分配将组分分离开来。银杏内酯的柱层析技术大多先使用有机溶剂对银杏内酯进行富集，然后使用酸性氧化铝柱、硅胶柱、大孔树脂柱、聚酰胺柱等层析柱，根据极性不同将银杏内酯与银杏黄酮或其它杂质分离。柱层析在银杏内酯分离纯化过程中研究较多，创新点主要为新型树脂材料或者新的银杏内酯单体的分离。例如，韩亚蓉等研究比较酸性氧化铝柱和硅胶柱，分别使用丙酮-乙酸乙酯、 乙醇-乙酸乙酯、乙酸乙酯-石油醚作为洗脱剂进行梯度洗脱，使用不同极性洗脱剂分别获得银杏内酯单体，将银杏内酯的纯度由6%提高到80%以上，并逐一进行分离。 张建等使用乙醇提取银杏叶粉末后，使用D101树脂柱两次过柱，洗脱液浓缩结晶后 获得银杏总内酯含量80%以上的产品。郁青等使用40%-50%乙醇水溶液提取银杏叶粉末后，使用724吸附树脂柱，水洗除杂，95%乙醇洗脱，洗脱液上聚酰胺树脂柱， 洗脱液浓缩干燥后得到银杏叶混合提取物，其中银杏萜内酯含量为10.6%以上，高于药典标准的6%。
3. 制备型液相色谱
张建等使用半制备型高效液相色谱仪，使用水-异丙醇（90：10）为流动相，220nm紫外检测，得到纯度80%以上的银杏内酯混合物，回收率在95%-105%之间，且在检测过程中可用分段收集法对 银杏内酯单体进行分离纯化。
4. （4）高速逆流萃取
高速逆流萃取不用任何固态的支撑物或载体而是利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，当其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量固定相。由于没有固态载体，且溶剂全部是萃取过程，所以不仅使样品能够全部回收，回收的样品更能反映其本来的特性，特别适合于天然生物活性成分的分离。苏静等将银杏叶提取物经乙酸乙酯萃取后，过酸性氧化铝和大孔树脂柱分离纯化得银杏总内酯，使用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系，研究不同溶剂比例中银杏内酯单体的萃取得率，经高速逆流色谱制备得到的 白果内酯和银杏内酯A、B、C最高质量分数分别为98.3%、98.9%、98.8%、98.4%。
参考文献：
[1]. 模拟移动床色谱分离提纯银杏内酯B.
[2]. 高丽娟等, 银杏内酯B的纯化. 精细化工, 2004(06): 第418-420页.
[3]. 王雷等, 银杏内酯B滴丸制备工艺优化研究. 中国药业, 2012. 21(09): 第31-33页.
[4]. 盛达, 银杏内酯B分离纯化工艺及其喷雾剂研究, 2017, 华中科技大学.
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