反相制备柱高效冲洗残留样品的方法?

RP-HPLC制备过程中，样品（小分子肽，含较多羟基）吸附性很强，并在柱子中降解成杂质，造成下一针洗脱样品时引入此杂质，纯乙腈、异丙醇、0.1%TFA乙腈、PBS缓冲盐pH3.0/8.0+60%乙腈、PBS缓冲盐+0.5M高氯酸钠pH3.0+60%乙腈……都不能完全冲洗干净，求高人指教更行之有效的方法！

展开

0评论 +关注

共5个回答

一闪一闪亮晶，总工程师（研发） 2018-12-26回答

建议冲柱子不要用含缓冲盐的流动相，缓冲盐本身容易残留在柱子里，造成柱子堵塞。不知道你的柱子直径是多大的？如果是9.4mm的，可以用0.1mL的甲醇反冲柱子20 min试试，柱子的另一端不接检测器，直接流出。每天做样 ... 我使用的是DAC100mm的C18填料的制备柱，我们的产品是用纯甲醇冲洗下来的，70%的甲醇冲不下样品，80%/90%的甲醇洗脱液体积太大！但用缓冲盐体系冲洗后，会有很多残留的产品出来，纯甲醇不能冲洗下来它们！但似乎还有残品残留柱子里，

3 评论 0 举报

仙气飘啊飘.，水处理工程师 2018-12-26回答

建议冲柱子不要用含缓冲盐的流动相，缓冲盐本身容易残留在柱子里，造成柱子堵塞。不知道你的柱子直径是多大的？如果是9.4mm的，可以用0.1mL的甲醇反冲柱子20 min试试，柱子的另一端不接检测器，直接流出。每天做样前冲洗柱子，做完样后用80%的水+20%的甲醇冲洗柱子，然后在用100%甲醇冲。尽量不用含磷酸盐的缓冲液，如果必须要用，一定放在A相，用完后及时冲洗柱子，进样量不要太大，进2针就及时冲下柱子再接着做。

展开

5 评论 0 举报

没关系，是爱，给排水工程师 2018-12-26回答

DMF加磷酸调PH至2.5~3.0，值得一试！浓度多少？有人建议说是用不要高于5%的DMF冲洗试试，不建议DMF太高比例！还说反相柱最好不要用丙酮和二氯甲烷冲洗！

展开

8 评论 0 举报

绅士，设备工程师 2018-12-26回答

缓冲盐冲不太好，酸乙腈也不行的话，可以试试DMSO+THF。二氯很伤柱子，别用。

7 评论 0 举报

你尽情哭，化工操作 2018-12-26回答

DMF加磷酸调PH至2.5~3.0，值得一试！

4 评论 0 举报