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人十二指肠腺癌细胞的研究及应用? 1

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人十二指肠腺癌细胞是从人十二指肠腺癌组织中分离出的上皮细胞样贴壁细胞系,主要用于人十二指肠腺癌的体外研究。

十二指肠腺癌是起源于十二指肠黏膜上皮的癌症,通常为单发,可由腺瘤恶变而来。组织学上可见腺瘤-腺癌转化及腺癌中的残存腺瘤组织。十二指肠腺癌多发生于降部乳头周围,约占60%,其次为壶腹下段,球部最少见。

如何操作:

1. 取出25cm2培养瓶,用75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

2. 细胞传代:

a. 细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃掉培养液,用PBS清洗细胞一次。

b. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,以1000rpm离心5min。

c. 弃掉上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。

d. 待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。

人十二指肠腺癌细胞的应用

蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究

通过比较蛋白质组学的研究手段,利用蓖麻毒蛋白诱导人十二指肠腺癌细胞(HuTu-80)进行实验,分析全蛋白差异表达的情况,为蓖麻毒蛋白在HuTu-80细胞中的作用机理提供新的研究窗口。

1. 首先采用硫酸铵盐析法从蓖麻种子中提取粗素,通过柱层析对其进行纯化,经过处理后得到纯化的蓖麻毒素。测定其浓度后,用获得的蓖麻毒蛋白对HuTu-80细胞进行ICso试验,结果显示细胞形态发生变化,IC50为200ng/ml。

2. 构建蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的模型,通过多种实验方法确定蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞早期凋亡时相,并观察细胞色素c的迁移情况。

结果表明,蓖麻毒蛋白对HuTu-80细胞的增殖和生长有明显的抑制作用,IC50为200ng/ml,最佳攻毒时间为8h。同时,HuTu-80细胞的形态和生物化学特征也发生了一系列的变化,细胞核出现皱缩和破裂,释放出致密颗粒状凋亡小体,细胞膜上的磷脂酰丝氨酸出现外翻,而细胞色素c随着蓖麻毒蛋白处理时间的增加,从线粒体易位到细胞浆逐渐显著。

参考文献

[1] iTRAQ‐coupled two‐dimensional liquid chromatography/tandem mass spectrometric analysis of protein profile in Escherichia coli incubated with human neutrophil peptide 1–potential in antimicrobial strategy[J].Yu SiZhou,MouadLamrani,Mary B.Chan‐Park,Susanna Su JanLeong,Matthew ChangWook,Wei NingChen.Rapid Commun.Mass Spectrom..2010(18)

[2] Waltonitone induces human hepatocellular carcinoma cells apoptosis in vitro and in vivo[J].Zhang Zhang,Shuo Wang,Hong Qiu,Chaohui Duan,Kan Ding,Zhengtao Wang.Cancer Letters.2009(2)

[3] Taurine protects transformed rat retinal ganglion cells from hypoxia-induced apoptosis by preventing mitochondrial dysfunction[J].Ka Chen,Qianyong Zhang,Jian Wang,Fengjin Liu,Mantian Mi,Hongxia Xu,Fang Chen,Kaihong Zeng.Brain Research.2009

[4] Quantitative Proteomic Analysis of Mitochondria in Aging PS-1 Transgenic Mice[J].You-Jun Fu,Shuling Xiong,Mark A.Lovell,Bert C.Lynn.Cellular and Molecular Neurobiology.2009(5)

[5] 栾世慧.蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究[D].内蒙古民族大学,2012.

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