核酸外切酶是一种特殊的酶，它需要一个游离末端才能降解DNA或RNA。根据不同的需求，核酸外切酶可以分为5′-核酸外切酶和3′-核酸外切酶。外切核酸酶Ⅲ(ExoⅢ)是大肠埃希氏菌的一种多功能酶，其主要活性是3′→5′-核酸外切酶，可以在双链DNA中形成单链DNA区域，因此在Sanger的DNA序列分析法中得到广泛应用。
T7核酸外切酶可以作用于双链DNA，沿着5→3方向去除5个单核苷酸。它既可以从5末端开始消化，也可以从双链DNA的切口或缺口处开始消化。此外，T7核酸外切酶可以降解5磷酸化的DNA和5去磷酸化的DNA。研究表明，它可以沿着5→3方向降解RNA/DNA杂交双链上的RNA或DNA，但不能降解双链或单链RNA。该酶是T7噬菌体基因6的产物。T7核酸外切酶具有以下特点：1.具有5→3核酸外切酶活性；2.可以切下DNA的5个单核苷酸。T7核酸外切酶的反应条件为：1XBuffer4[50mMKAc，20mMTris-Ac，10mMMg(Ac)2，1mMDTT(pH7.9@25℃)]，温度为25℃。
有研究采用不依赖连接反应的克隆法，利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆Notch2长片段基因。将难以扩增的Notch2cDNA的编码序列(7416bp)人为分成3段，通过对这3个片段和载体骨架的引物进行碱基硫代磷酸化修饰，使用这些引物扩增Notch2的3个片段和载体骨架。然后，使用T7核酸外切酶分别处理PCR产物，产生4个具有3’互补突出末端的片段，并将这4个末端突出的片段进行退火复性，完成Notch2基因的克隆。通过琼脂糖凝胶电泳结果显示，Notch2的3个片段和载体骨架的PCR产物大小与预期大小相符。通过PCR、酶切和测序对退火复性获得的克隆进行鉴定，确定Notch2编码序列已经成功插入到pcDNA3.0-3*Flag载体中。因此，利用T7核酸外切酶和引物的碱基磷酸化修饰进行的不依赖连接反应的克隆方法可以用于长片段基因的克隆。
[1] 微生物学词典
[2] 利用T7核酸外切酶和硫代磷酸化修饰引物克隆长片段基因的研究
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