紫外线修复酶UvrA，UvrB，UvrC和UvrD系统是主要参与紫外线引起的DNA损伤修复的酶。它们能够启动剪切性修复，修复紫外线引起的DNA损伤。这种修复方式不需要光的参与，因此被称为“暗”修复。在细菌体内，核苷酸切除修复需要UvrA，UvrB和UvrC蛋白来启动CPD和6-4光产物的修复，以及其他方式的DNA损伤修复。Tte uvrD解旋酶也被称为解旋酶Ⅱ，是由720个氨基酸组成的蛋白质。它与Rep蛋白具有相似性，能够与DNA稳定结合。UvrD蛋白的二聚体形式被认为是有效的解旋形式。在较高酶浓度的情况下，它可以启动单链DNA的部分、缺口DNA或平端DNA的解旋。
一项研究以腾冲嗜热厌氧菌基因组DNA为模板，通过PCR克隆编码Tte uvrD解旋酶的基因tte-uvrd。将该基因插入原核表达载体pET-32a(+)，构建了重组表达载体pET-32a(+)-tte-uvrd，并将其转入E.coli BL21中。通过蓝白斑筛选和双酶切法筛选阳性重组转化子，挑选测序正确的单个阳性菌落。在IPTG诱导下表达出重组蛋白Tte-uvrD。诱导后的菌体经超声破碎和离心，上清液用硫酸铵沉淀法初步纯化，透析除盐，冻干复溶后得到粗酶液。用tHDA反应验证了Tte uvrD解旋酶粗酶液的活性。比较了不同储存温度下粗酶液酶活保持的时间，并将-20℃下储存两个月的粗酶液与商品化纯酶的tHDA反应灵敏度进行了比较。结果表明，通过该克隆方法成功克隆出耐热Tte uvrD解旋酶，并且粗酶液具有解旋活性。粗酶液在-20℃下可以保持稳定的酶活达到80天，而在4℃下只能保持约一周的酶活。-20℃下储存两个月的粗酶液能够达到与商品化纯酶相当的灵敏度。
[1] 紫外辐射引起DNA损伤的修复
[2] 腾冲嗜热厌氧菌耐热解旋酶Tte-uvrD的克隆表达及粗酶的初步应用
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