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PCR时,不加样本只加引物和mix就能扩增出来目的条带,原因何在?

最近鉴定一批突变子小鼠,引物根据neo-site位点设计,扩增目的条带660bp,试验中发现:只要加引物和mix就能扩增出目的条带,无需样本DNA,因此对我鉴定工作带来极大困扰,已经更换mix,从新从不同公司合成了引物,结果仍无济于事,敢问高人,原因何在?污染源何在?如何解决?望指点。

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共4个回答
你好,我想问一下,你的这个问题已经解决了吗?我们实验室也遇到了同样的情况,想知道如何解决,谢谢
小片段的话就是引物二聚体,目的条带大小有带就是过程污染,比如引物,水,操作过程中飞沫,实验室环境。
污染是实验室操作不规范导致的,扩增管打开后,扩增产物会形成气溶胶,导致实验室污染,临床基因检测实验室都是严格分区,控制气压,各区的加样枪等都不可混用,科研实验室根本无法做到这样,所有假阳性很正常,实验室污染了只能换实验室彻底消除污染,当然你可以换引物,重新设计的引物必须要位于原来引物的两侧才可以
实验室污染了。就是PCR产物到了空气中。理论上PCR加样的地方与扩增及跑电泳的地方越远越好。处理办法是:停止在本实验室做此PCR扩增一周;实验室通风,最好用紫外光照一照;重新合成引物,到别的实验室做实验,所有的东西都借别的,包括枪、枪头、水、mix等。
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