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如何对醋酸氯地孕酮进行检测? 1

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醋酸氯地孕酮作为一种强效的激素类药物,可能会对人类的健康产生一定的副作用。


背景:醋酸氯地孕酮是与醋酸氟孕酮、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮结构和功能类似的人工合成孕激素,作用类似于黄体酮。孕激素对垂体促性腺激素的释放有一定的抑制作用,动物实验表明有死胎率增加和致畸作用,副作用有:①恶心、头晕、倦怠;②突破性出血;③孕期服用,会增加女性后代的男性化作用。孕激素类药物能增强体内物质 沉积和改善生产性能,可以很快产生显著和直接的经济效益,因此,对生产者有很大的吸引力。畜牧业中使用孕激素类药物(非治疗用途) 已有很长的历史,但人类长期食用含有激素的肉制食品,即使含量甚微,亦会明显影响机体的激素平衡,而且有致癌危险,对幼儿造成发育异常等危害。因此,开发一种能检测孕酮残留量的方法是十分必要的。


含量检测:

1. 饲料中

1)报道一

左文霞等人建立了高效液相色谱-紫外检测法测定饲料中醋酸氯地孕酮药物的方法。样品经乙腈提取,以固相萃取技术净化,C18柱分离,紫外检测器检测,检测波长为285 nm,流动相为乙腈-水(53∶47,V/V)。结果表明,醋酸氯地孕酮浓度在0.2~100μg/mL与峰面积呈良好的线性关系(R2>0.999),方法的检测限为0.1 mg/kg,定量限为0.2 mg/kg。样品平均回收率为76.24%~95.49%,日内变异系数为5.54%~10.13%,日间变异系数为6.24%~11.54%。


2)报道二

在贾涛等人的报道中,醋酸氯地孕酮脂溶性强,适合反相色谱法分离,有较强的紫外吸收,因此可用高效液相色谱法检测。试样中醋酸氯地孕酮用乙腈提取,HLB柱净化,乙腈洗脱,浓缩后流动相溶解,高效液相色谱法测定,外标法定量。经试验:醋酸氯地孕酮标准溶液系列浓度的标准曲线线性方程为y=43228x+7685.2,相关系数r=0.9995,表明醋酸氯地孕酮浓度在0.2100μg/mL范围内线性关系良好;配合饲料、浓缩料中醋酸氯地孕酮的添加浓度为0.2、2、5 mg/kg时,平均回收率范围为72.2%-98.9%,日内变异系数范围为5.5%-8.8%,日间变异系数范围为10.5%-13.6%,该方法回收率高,精密度好;检测限为0.1 mg/kg,定量限为0.2mg/kg。


2. 牛奶中

陈晓红等人建立牛奶中21а-羟基孕酮、17а-羟基孕酮、炔孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮和孕酮等8种孕激素残留的超快速液相色谱-串联质谱检测方法。方法:样品经甲醇提取后,Waters OasisHLB小柱进行净化,Shim-pack XR-ODSⅡ(100 mm×2.0 mm i.d.,2.2μm)快速柱上,以内含0.1%(V/V)甲酸和5 mmol/L乙酸铵的乙腈/水溶液进行梯度洗脱分离,采用电喷雾(ESI)电离正离子多反应监测模式(MRM)测定。各待测物在0.5μg/kg~50.0μg/kg范围内具有良好的线性,相关系数>0.999,回收率在73.0%~97.5%范围,相对标准偏差(RSDs)在3.8%~8.6%之间,最低定量检出限在0.1μg/kg~0.5μg/kg范围。该方法适合于牛奶中痕量孕激素残留的检测。


3. 脂肪中

崔英爱等人建立脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留量的测定方法。方法色谱柱:Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(65:35);流速:1.0ml/min;柱温:35℃;检测波长:292nm;进样量:40μl。样品的室内加标平均回收率为86.7%~91.8%,室内相对标准偏差为4.5%~6.0%,室间加标平均回收率为81.4%~95.0%,室间相对标准偏差3.7%~7.1%,定量测定低限(LOQ)为10μg/kg。该方法可用于脂肪中醋酸美仑孕酮、醋酸甲地孕酮和醋酸氯地孕酮残留含量的测定。


4. 防脱发类化妆品

刘丹等人建立了同时测定防脱发类化妆品中氟他胺、非那雄胺、左炔诺孕酮、醋酸环丙孕酮、醋酸氯地孕酮和度他雄胺等6种抗雄激素药物含量的HPLC-DAD方法。实验采用C18色谱柱,柱温30℃,流动相为甲醇-水,等度洗脱;检测波长225 nm、285 nm。结果表明6种药物均在2~100μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r>0.9990);经膏霜、乳液、水3种基质测试,平均加样回收率为97.6%~99.8%,RSD为0.05%~0.97%。该方法简便、重复性好,可用于判断防脱发类化妆品中6种抗雄激素药物的非法添加情况。


5. 梅花鹿鹿茸中

黄胜广等人采用分散固相萃取的前处理技术,建立了一种UPLC-MS/MS法测定梅花鹿鹿茸中醋酸氯地孕酮的检测方法。鹿茸样品以乙腈为提取剂,50 mg PSA净化。液相色谱条件:ACQUITY BEH C18柱(2.1 mm×50 mm, 1.7μm),流动相A为乙腈,流动相B为水,柱温35℃;质谱条件:正离子模式(ESI+),多反应监测(MRM)模式。鹿茸中醋酸氯地孕酮含量采用外标法定量。结果表明,醋酸氯地孕酮在0.1~50 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,相关系数R2大于0.996, LOD为0.1μg/kg, LOQ为0.3μg/kg。空白样中添加浓度为0.5, 2和5μg/kg的醋酸氯孕酮,其平均回收率为68.10%~92.3%, RSD均小于10%。该方法可用于梅花鹿鹿茸中醋酸氯地孕酮的检测。


参考文献:

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