BCA法是一种在碱性环境下测定蛋白质浓度的方法。它利用蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+，形成稳定的紫蓝色复合物。该复合物在562 nm处有最大的光吸收值，并且与蛋白质浓度成正比。BCA法具有高灵敏度、简单操作、稳定的试剂和颜色复合物以及对干扰物的抗干扰性等优点。因此，BCA法适用于微量蛋白质浓度的测定。
BCA法的产品规格如下：
溶液 A 100ml
溶液 B 100ml
溶液 C 5ml
蛋白标准品 20ml（2mg/ml）
BCA法的产品应在室温下保存，有效期为一年。
标准品以及工作液的制备方法如下：
A. 牛血清白蛋白标准品稀释液的制备
B. 微量BCA工作液的制备
1. 使用下列公式计算所需工作液的总体积：(标准孔数 + 待测样品孔数) × (重复数) × (每个样品孔的工作液体积) = 所需工作液的总体积。例如，在标准的试管测定中，每个样品需要3个不同的稀释度和2次重复，所以(8个标准孔 + 3个待测样品孔) × (2重复) × (1 ml) = 22 ml BCA工作液（可以多配到25 ml）。
2. 配制BCA工作液：将溶液A、溶液B和溶液C按50：48：2的比例混合，得到BCA工作液。例如，5 ml溶液A + 4.8 mL溶液B + 200ul溶液C。
BCA法有两种使用方法：
一：微孔板测定法
1. 吸取150ul的标准品及未知样品分别至微孔板中。
2. 滴加150ul的工作液到每孔中并充分混合30秒。
3. 盖上微孔板并在37°C孵育2小时或60°C放置1小时。
4. 微孔板冷却至室温。
5. 10分钟内在酶标仪上测量562nm时的吸光值。注意：冷却至室温后依然会继续显色。但是，在室温时的显色比例已经很低，在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
6. 绘制标准曲线，测量样品的浓度。
二：试管测定法
1. 吸取1.0ml的标准品及未知样品分别至对应标记的检测管中。
2. 滴加1.0ml的工作液至每管中并充分混合。
3. 盖上检测管并于60°C水浴孵育1个小时。
4. 所有试管冷却至室温。
5. 10分钟内在分光光度计上测量562nm时的吸光值。注意：冷却至室温后依然会继续显色。但是，在室温时的显色比例已经很低，在10分钟内检测到的吸收值一般都不会有太大影响。
6. 绘制标准曲线，测量样品的浓度。
[1] 微量 BCA 蛋白质定量试剂盒说明书
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