细胞冻存液的选择与应用？ ¹

细胞冻存液是一种用于细胞低温保存的液体。为了避免冰晶对细胞造成伤害，目前在细胞冻存过程中需要添加冷冻保护剂。冷冻保护剂分为渗透性和非渗透性两种，其中渗透性冷冻保护剂起到重要作用。常用的渗透性冷冻保护剂包括甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇、丙醇和甲酰胺等。

渗透性冷冻保护剂能够穿过细胞膜进入细胞内，其中最常用的是二甲基亚砜(DMSO)。然而，DMSO对细胞具有一定的毒性，可能引起一些不良反应。因此，在临床治疗中，应尽量减少DMSO的使用量，或者寻找更安全的替代品。

近年来，一些公司已经研发出不含DMSO成分的细胞冻存液，如日本全药工业株式会社生产的GMP级无血清无DMSO的细胞冻存液。然而，这些冻存液在长时间保存细胞时仍然存在一定程度的细胞损伤，细胞存活率有待进一步提高。

一项公开的技术专利EP2305792A提供了一种不含动物源成分和DMSO的细胞冻存液，使用安全无毒的琥珀酰-ε-多聚赖氨酸作为冷冻保护剂。这种冻存液避免了动物源性物质的引入，减少了污染的风险。然而，该技术所公开的细胞冻存液在长时间保存细胞时仍然会对细胞造成一定程度的损伤，需要进一步改进。

如何选择和应用细胞冻存液？

为了安全无毒地冻存细胞并提高细胞存活率，CN201811072202.1提供了一种细胞冻存液。该细胞冻存液包含酰基化ε-多聚赖氨酸、多元醇和平衡缓冲液。与已有的琥珀酰-ε-多聚赖氨酸冻存液相比，该冻存液添加了多元醇，能够进一步减小冻存复苏过程中对细胞的损伤，提高细胞存活率。

使用该细胞冻存液进行细胞冻存复苏的方法包括以下步骤：

S1: 取待冻存细胞悬液，离心收集细胞，并用细胞冻存液重悬细胞并调整细胞浓度，得到细胞悬液；

S2: 将细胞悬液分装于冻存管或冻存袋中，然后进行冻存；

S3: 在30-40℃的条件下解冻冻存管或冻存袋，得到复苏后的细胞。

参考资料：

[1] CN201811072202.1 细胞冻存液、冻存复苏方法及其应用