维多利亚蓝胶原纤维染色液是一种用于胶原纤维和弹力纤维双重染色的染色剂。它具有良好的重复性和清晰的对比度,色彩鲜艳且不易褪色。
维多利亚蓝胶原纤维染色液的制备方法如下:将维多利亚蓝、糊精、间苯二酚和蒸馏水混合后加热煮沸,边煮边搅拌约5分钟。然后将三氯化铁水溶液加热煮沸后慢慢倒入混合液中,继续煮沸3分钟,不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤,将滤纸上的残渣放在恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末,再将其溶于乙醇液中,加入盐酸和苯酚,成熟后即可使用。
染色方法如下:将组织切片脱蜡至水,然后在乙醇中洗涤。接着将切片直接浸入维多利亚蓝液中染色,再在乙醇中分色,用蒸馏水洗涤,用天狼星红饱和苦味酸液染切片,最后进行脱水和封固。
经过染色后,胶原纤维呈红色,弹力纤维呈蓝绿色,红细胞及肌肉呈黄色。
1、悬浮细胞使用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan的生成不仅与活细胞数成比例,也受作用时间的影响,因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。
3、MTT溶液为黄色,需避光保存,长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时,请勿使用。MTT溶液在较低温度情况下会凝固,可以在适当温度下恢复溶解后使用。
[1] 胶原纤维和弹力纤维双重染色方法的改进