磷脂是细胞膜和细胞内膜结构的主要组成成分,由甘油、脂肪酸和含氮的碱基组成。磷脂在大脑、神经组织、骨髓和肝脏等组织中含量较多,可分为卵磷。脂、脑磷脂和神经鞘磷脂三种。磷脂的常用染色方法有酸性苏木红法和吡啶提取法。酸性苏木红法又称为Baker磷脂染色液,通过阻留磷脂进入固定液,使其与金属离子结合形成不溶性的磷脂螯合物,进而形成蓝黑色的复合物,使磷脂和神经鞘磷脂呈现蓝黑色。
1、将组织固定于Baker甲醛钙固定液中16小时。
2、将组织浸染于60℃恒温箱中的Baker媒染液。
3、过夜进行流水冲洗。
4、使用低温恒冷切片机或半导体制冷切片机切片,切片厚度为8μm。
5、切片用蒸馏水洗净后,裱贴于载玻片上,晾干。
6、再次将切片浸染于60℃恒温箱中的Baker媒染液。
7、稍作流水洗净,然后用蒸馏水洗净。
8、将切片放入磷脂染色液(酸性苏木红法)中,在37℃恒温箱中浸染。
9、进行流水冲洗。
10、将切片放入Baker分化液中,在37℃恒温箱中浸染。
11、进行流水冲洗,然后用蒸馏水洗净。
12、使用甘油明胶进行封固。
1、该染色法可能会产生假阳性,如果需要,可以使用脂质提取试剂进行预处理后再进行染色。
2、酸性苏木红染色液不可反复使用。
3、分化液可以反复使用,直到颜色变淡才需要更换。
[1]磷脂染色液(酸性苏木红法)说明书