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磷脂染色液的操作步骤是什么? 1

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背景及概述[1]

磷脂是细胞膜和细胞内膜结构的主要组成成分,由甘油、脂肪酸和含氮的碱基组成。磷脂在大脑、神经组织、骨髓和肝脏等组织中含量较多,可分为卵磷。脂、脑磷脂和神经鞘磷脂三种。磷脂的常用染色方法有酸性苏木红法和吡啶提取法。酸性苏木红法又称为Baker磷脂染色液,通过阻留磷脂进入固定液,使其与金属离子结合形成不溶性的磷脂螯合物,进而形成蓝黑色的复合物,使磷脂和神经鞘磷脂呈现蓝黑色。

组成[1]

操作步骤[1]

1、将组织固定于Baker甲醛钙固定液中16小时。

2、将组织浸染于60℃恒温箱中的Baker媒染液。

3、过夜进行流水冲洗。

4、使用低温恒冷切片机或半导体制冷切片机切片,切片厚度为8μm。

5、切片用蒸馏水洗净后,裱贴于载玻片上,晾干。

6、再次将切片浸染于60℃恒温箱中的Baker媒染液。

7、稍作流水洗净,然后用蒸馏水洗净。

8、将切片放入磷脂染色液(酸性苏木红法)中,在37℃恒温箱中浸染。

9、进行流水冲洗。

10、将切片放入Baker分化液中,在37℃恒温箱中浸染。

11、进行流水冲洗,然后用蒸馏水洗净。

12、使用甘油明胶进行封固。

注意事项[1]

1、该染色法可能会产生假阳性,如果需要,可以使用脂质提取试剂进行预处理后再进行染色。

2、酸性苏木红染色液不可反复使用。

3、分化液可以反复使用,直到颜色变淡才需要更换。

主要参考资料

[1]磷脂染色液(酸性苏木红法)说明书

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