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使用C8柱,柱压不断升高,这是为什么?求有经验的大佬解答,跪谢?

先讲讲我跟QC这个行业的缘分,本人化工专业出身,做了三年工艺研发,后转向QC 这块,目前也就不到三年的分析经验,之前在制剂厂中规中矩地做事,就是一名普通的QC,照着SOP 和记录来,出了问题也是找主管和经理,自己没有花太多时间去研究这方面的专业知识和问题;制剂厂干了一年半,一次机缘巧合,跳槽到了另一家小公司,直接干起了QC主管,其实分析这块我上面已经没人了,换句话我就是QC老大了,不适应,有很多需要学的,只能边做边学了。
      现在正是进入专业问题,2021年12月中旬接到一个新项目-吗替麦考酚酯,不知道有没有大佬检过这个产品,药典要求用辛基柱(4.6*250*5),当时QC这里没有C8柱,厂虽小,但是柱子都是专用的,然后买了第一根C8(天津迪马科技的产品),仪器用的是国产福立的LC5090,流动相是乙腈:磷酸盐缓冲液(PH5.3),等度模式,当时的柱压是8.1mpa,主峰出峰时间为35分钟(药典提示的出峰时间是22分钟,相差甚远);第一个星期柱压正常,基本没有波动,从第二周开始,柱压一天比一天高,一周后柱压直接到了14mpa以上,奇怪的是柱压一直升高,但是出峰时间却没什么影响;后面担心柱压继续升高,怕柱子直接报废了,然后就找了卖柱子的,也找了迪马技术售后。他们的观点是:柱子没问题,说是我冲柱子的方法有问题(换缓冲液前冲到等比例的水相,做完后90%的水冲洗一小时以上,再换50%乙腈冲洗20分钟以上,再换90%乙腈或者纯乙腈冲洗20分钟以上,我觉得这样冲洗没问题,对方也认可)或者就是样品特性,样品本身容易在流动相中析出(但这个不是药典的方法,不是经过了比较严格的方法摸索了吗,不至于出现这样的问题吧,否则方法研发阶段就直接毙了)。后来没法,反冲柱子也不见效果,反而柱压越冲越高,然后就直接返厂修复了(对方告知:柱子是消耗品,不能退不能换,只能修。也不知道能免费给你修几次)。
      元旦过后柱子修复好寄回来,第一天柱压8.5mpa,与第一次用基本差不多,当时还蛮高兴的,结果不到一周柱压又升到13mpa了,无语。这个时候找售后基本已经没别的话了,好好冲柱子等等。后来就比较稳定的在13mpa做样了,有一次把这根柱子拿到岛津的仪器LC20-AT上试了试,发现柱压只有8.9mpa,以为是仪器的问题(觉得国产的一些东西就是没有国外的做的好,因为福立还存在不能走10%有机相以下的双泵模式,基线会出现有规律的比较大的波动),谁知当天做样过程还好,做样结束冲柱子的时候,柱压直接到15mpa了,怎么冲都下不来了;第二天来了,再冲也只是降到了13mpa。
       一直觉得柱压升高的问题和出峰时间相差较大的问题是因为柱子,于是又买了一根岛津的C8,用的第一天就做了方法验证,连续做样近20个小时,柱压从一开始的8.4mpa升到了近10mpa,出峰时间为26分钟,比较接近药典的22分钟,除了压力升高以外,检测数据基本正常。期间有因为试剂的问题,前期用的弗顿牌子的,用前没有过滤(因为觉得本身就是色谱级的),出现柱压升高的情况后,所有试剂全部过滤,情况没有好转;另外还有科密欧品牌的试剂,也差不多。另外,前期调PH,因为PH计比较老旧,存在PH调节不准确的问题,后更换了新的PH计后(缓冲液PH之前配的缓冲液PH5.3,后实测5.6),出峰时间从40分钟前移至33分钟,柱压的问题没有解决。
     难不成真的是试剂的问题,天津迪马科技的售后说听都没听过天津还有科密欧试剂公司,有没有大佬遇到过类似的问题,关于这个柱压实在是没招了,求救Ing
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共3个回答
你的流动相不干净吧?滤膜检测过吗?
之前是水相过滤,纯甲醇或乙腈未过滤,出现这个问题后,全部过滤了
滤膜要怎么检测?你的意思是滤膜失效了,没有起到过滤的效果吗?
我们其他产品也都有用到缓冲盐液的,其他的柱子都没有出现过类似的问题
你的流动相不干净吧?滤膜检测过吗?
1. 设备压力升高,可以先确认是管柱压力升高还是分析设备本身压力升高?确认的方法是可以拆掉管柱,把管线对接(即原本装管柱的出入口端)用二通连接。
2. 如果确认是管柱压力升高,一般有几个可能,流动相问题,样品问题,流动相洗脱的问题,每一种可能要一一排除。
3. 使用缓冲盐为流动相就要特别注意了,加上之前PH计又出现问题,所以有可能在碱性环境下填料键合部分脱落导致柱压升高。
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